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实验原理
啮齿类动物具有探究新环境的习性,但是又厌恶强光和开阔地。EPM就是利用啮齿类动物对新异环境的探究行为和对高悬着的开臂的恐惧形成的矛盾冲突状态,评价**的抗焦虑或致焦虑作用。EPM*初是由Montgomery在1955年的工作发展而来的。Pellow等人根据研究需要设计出了具有两个开臂和两个闭臂的十字迷宫,并将迷宫抬高借以增加动物进入开臂时的恐惧。高架十字迷宫是一个简单、快速、结果重复性好的焦虑检测模型,因此广泛应用于抗焦虑**的研究与开发。
实验装置
高架十字迷宫可以是木质结构,现在多为无味的塑料材质,颜色为黑色。50cm*10cm的两个相对开臂(open arm)和两个50cm*10*40cm的相对闭臂(closed arm),闭臂的上部是敞开的。迷宫中央有一10cm*10cm的开阔部,迷宫距离地面50cm高。迷宫上方安装录像监控器,以录制动物在迷宫中的活动情况,以供日后分析使用。
实验方法
1. 在实验前一个星期,每天抚摸实验动物1-5min,连续7天,借以消除实验动物对实验者的恐惧。
2. 将实验动物放入迷宫中央区,头朝开臂,并注意此后每只实验动物均放在同一位置。同时开启摄像监控器记录5min内实验动物开臂和闭臂的进入次数及进入各臂的时间。实验过程中实验者需距离迷宫1米的距离。
3. 记录结束后将实验动物放回饲养笼具内。同时清理迷宫,并用5%的醋酸水溶液或75%的酒精擦拭迷宫,借以消除动物气味对后继实验动物的影响。
实验数据
主要应用的实验数据:
1.开臂进入次数百分比= 开臂进入次数/开臂进入次数+闭臂进入次数
2.开臂滞留时间百分比= 开臂滞留时间/开臂滞留时间+闭臂滞留时间
此两指标作为评价焦虑的指标,通常这两个指标高度相关。如果一个**增加动物对开臂的偏爱(即增加进入开臂的次数和在开臂内滞留时间),却不改变入臂总次数和入臂总时间,也即开臂进入次数百分比和开臂滞留时间百分比升高,则认为该**具有抗焦虑的作用。相反一个**如果减少实验动物对开臂的偏爱,而入臂总次数和入臂总时间不变,则认为该**具有致焦虑的作用。
注意事项
1. 为了提高大鼠入臂总次数,避免大鼠总是躲在闭臂中,通常在测试前先将大鼠放在开阔场地(open field)中适应5min后再放入迷宫。
2. 实验前一周每天抚摸大鼠可以明显减少大鼠对实验者的恐惧感以及无关刺激对迷宫中大鼠的影响。
3. 尽管还没有证据证实在**中不同时间对于实验结果是否有明显的影响。但是结合本人实验的数据建议实验动物检测时间*好在上午9:00至下午15:00之间进行,如果有条件,且需要重复多次检测,尽量在每天同一时间段检测,以减少数据的波动。
4. 如果实验中实验动物从高架上跌落,*好将此动物剔除。现在的厂家生产的高架十字迷宫在开臂的周边加了一个小边。但这样会改变焦虑的性质和降低抗焦虑**的敏感性。
5. 高架十字迷宫具有某些表观信度,动物不愿探究迷宫开臂可能由于啮齿类动物厌恶空旷区域和迷宫抬高引起的恐惧两者共同作用的结果,目前尚不清楚这两个因素哪个在致焦虑中占优势。
6. 进入开臂的次数和在开臂停留的时间随年龄的增长而减少。因此年龄较大的大鼠抗焦虑的效果较弱,但是对于安定类**的**反应增强。
7. 高架十字迷宫*初用于雄性大鼠,但是也可用于雌性大鼠。但是所测定的行为有所不同。用雄性大鼠主要测定焦虑,而用雌性大鼠主要测定活动性。
8. 除了大鼠,高架十字迷宫还用于小鼠,也有文献报道用沙土鼠进行检测,但是存在明显品系差异。
9. 迷宫设计时对开臂的相对强光有所考虑。实验中建议高架十字迷宫光源避免直接照射在高架十字迷宫上,也需要避免光线不均匀的照射在各臂上。可在高架十字迷宫周围悬挂具有一定遮光性的布帘造成迷宫的周边环境相对一致以及弱光照环境。
晶莱生物服务流程
晶莱生物实验服务项目
动物实验 | 细胞生物学 | 病理实验 |
消化系统模型 | 细胞培养 | 病理染色 |
胃酸分泌模型 | 普通细胞株 | HE染色 |
脓毒症模型 | 细胞缺氧培养 | 油红O染色 |
胃溃疡模型 | 细胞培养+支架 | 番红固绿染色 |
胰腺炎模型 | 干细胞培养 | Masson染色 |
肝纤维化模型 | 原代细胞分离/提取/培养 | 天狼猩红染色 |
DIO肥胖模型 | 细胞转染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
胆结石模型 | Trans well共培养 | 阿利新蓝染色 |
结肠炎(UC)模型 | 细胞增殖 | 甲苯胺蓝染色 |
脂肪肝模型 | 细胞计数 | 尼氏染色 |
急性肝损伤模型 | 生长曲线测定 | LFB髓鞘染色 |
免疫、代谢系统疾病模型 | 存活曲线测定 | 普鲁士蓝染色 |
骨质疏松模型 | ccK-8增殖检测 | VG染色 |
糖尿病模型 | MTT增殖检测 | EVG染色 |
高尿酸血症模型 | CFSE检测增殖-流式检测 | VonKossa染色 |
呼吸系统模型 | BrDU检测-免疫荧光法 | 刚果红染色 |
肺纤维化模型 | 细胞凋亡 | 苏丹黑B染色 |
慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式检测细胞凋亡 | Trap染色 |
急性肺损伤模型 | WB检测凋亡相关蛋白 | 抗酸染色 |
哮喘模型 | 透射电镜观察凋亡小体 | 革兰氏染色 |
肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB显色) | AB-PAS染色 |
支气管炎模型 | Tunel(荧光法,含试剂盒) | 亚甲基蓝染色 |
泌尿生殖系统模型 | DNA ladder法 | 苯胺蓝染色 |
慢性肾衰模型 | 细胞周期 | 荧光 DAPI染色 |
急性肾衰模型 | 细胞显微计数 | 普鲁士蓝染色 |
肾间质纤维化模型 | PI染色 | 间苯二酚碱性品红染色 |
肾结石模型 | BrdU渗入法 | 银染 |
肾炎模型 | 免疫荧光染色 | 黑色素染色 |
子宫内膜异位症模型 | PI流式检测细胞周期 | 镀银染色 |
心血管系统模型 | 细胞运动 | PASM 六胺银染色 |
冠心病模型 | Transwell检测细胞迁移 | VG染色 |
心肌梗死模型 | Transwell检测细胞侵袭 | 富尔根染色 |
心脏骤停模型 | 细胞划痕 | 亚甲基蓝染色 |
慢性心力衰竭模型 | 细胞克隆 | 碘-碘化钾染色 |
动脉粥样硬化模型 | 集落形成法/稀释铺板方法 | Goldner三色法染色 |
白血病模型 | 软琼脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
高血压模型 | 毛细管克隆法 | 改良苯酚品红染色 |
神经系统模型 | 体外实验血管生成 | 网状纤维染色 |
脑卒中模型 | 磁珠分选细胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
栓塞性脑梗死模型 | 流式分选细胞 | 镀银染色 |
脑出血模型 | 开机费 | movat五色染色 |
脑损伤模型 | 单色 | 维多利亚蓝染色 |
脊髓损伤模型 | 双色 | 免疫组化 |
帕金森模型 | CBA多细胞因子流式检测 | 免疫组化预式 |
老年痴呆模型 | 组织/血液细胞制备 | 免疫组化正式 |
应激模型 | 组织单细胞制备 | 免疫荧光(石蜡-单标) |
骨骼疾病模型 | 中性粒细胞提取 | 免疫荧光(石蜡-双标) |
骨折模型 | 其他样本细胞制备(如血液等) | 免疫荧光(石蜡-三标) |
骨缺损模型 | 外周血PBMC分离 | 免疫荧光(冰冻-单标) |
风湿免疫性关节炎模型 | 线粒体组学 | 免疫荧光(冰冻-双标) |
骨关节炎模型 | 线粒体膜电位检测-流式法 | 制片前处理 |
五官疾病模型 | 线粒体膜电位检测-免疫荧光法 | 石蜡组织包埋 |
眼科疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--流式 | 特殊包埋(细胞、材料、眼球等) |
鼻腔疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光 | 软化(肝硬化、皮肤结痂、植物等) |
皮肤疾病模型 | 线粒体通透性转换孔(mPTP) | 骨组织脱钙(小) |
皮肤损伤模型 | 溶酶体免疫荧光法 | 骨组织脱钙(大) |
肿瘤疾病模型 | 线粒体+溶酶体共定位 | 骨组织EDTA脱钙(小) |
原位瘤模型 | 内质网 | 骨组织EDTA脱钙(大) |
转移瘤模型 | 线粒体钙瞬时变化检测-流式 | 石蜡白片 |
皮下植瘤模型 | ATP检测 | 细胞爬片 |
ADP检测 | ||
AMP检测 | ||
流式 | DNA/RNA半定量检测 | 基因编辑工具 |
组织细胞悬液处理 | pcr检测mRNA | 合成(3保1)片段/质粒/引物合成 |
细胞处理 | microRNA检测 | 质粒载体构建 |
血液标本处理 | LncRNA表达量的检测 | 过表达腺病毒载体构建包装 |
细胞刺激培养 | CirRNA表达量的检测 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
单色检测 | 凝胶电泳 | 过表达慢病毒载体构建包装 |
双色检测 | 基因合成 | shRNA慢病毒载体构建包装 |
Annexin V/PI凋亡 | <300 | 过表达腺相关病毒载体构建包装 |
细胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
1500 - 5000 | 稳转细胞株 | |
>5000 | ||
特殊序列 | ||
ELISA | WB | qPCR |
组织匀浆处理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
ELISA(不含试剂盒)48T/kit | WB检测一(10孔膜/指标) | mRNA引物设计及合成 |
ELISA(不含试剂盒)96T/kit | 灰度值分析及作图一(10孔膜/指标) | miRNA引物设计及合成 |
ELISA(含国产试剂盒)48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物设计及合成 |
ELISA(含国产试剂盒)96T/kit | WB检测二(10孔膜/指标) | CircRNA引物设计及合成 |
灰度值分析及作图二(10孔膜/指标) | mRNA RT-qPCR | |
miRNA RT-qPCR | ||
LncRNA RT-qPCR | ||
CircRNA RT-qPCR |
收费标准/服务周期/提供结果:
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