时间:2021-09-29浏览次数:2455
脊髓损伤 | 开放型急性脊髓损伤模型 | 大鼠 |
闭合型急性脊髓损伤模型 | 大/小鼠 | |
慢性缺血性脊髓损伤 | 大鼠/兔 |
急性脊髓损伤(ASCI)小鼠模型的建模方法
模式动物品系:SPF级ICR小鼠,健康,雄性,8~12W
实验分组:实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期:4-6 weeks
建模方法:
取 ICR 小鼠,戊Ba比妥钠麻醉后,采用椎板切除术暴露 T9-T10 处脊髓。然后采用脊髓打击器,于暴露脊髓处施加 90 kilodynes 的力造成挫伤型脊髓损伤,SCI 后连续 10 天每天肌肉注射庆大霉素(8mg/kg)防止术后感染,并每天两次人工膀胱按压挤尿直至恢复自主膀胱活动为止(防止尿潴留)。
处理一周后进行 BBB 评分评估小鼠后肢运动能力;
BBB score=0 时,则模型构建成功。将构模成功的小鼠分为两组,每组 8只,于挫伤型 SCI 处理 1week 后,于大鼠尾静脉处进行注射处理(模型组只注射生理盐水,治疗组注射含有受试药物的生理盐水 )。
SCI 后,16 只小鼠饲养 3week 时,根据SCI后 3 week 结果每组取 3 只效果最显著的小鼠取脊髓进行病理学检测,剩余 10 只小鼠继续饲养并与5week,7week,9week进行BBB 评分和机械触诱发痛检测。SCI后 9week 时所有受损脊髓中心进行冻存或 OCT 包埋。
模型评价
1. BBB test
于药物注射后每隔一周进行 BBB test,直至移植后 8 周(即 SCI 后 3week、5week、7week、9week)。药物注射后 2 周(即 SCI 后 3week)共 16 只小鼠进行行为学检测数据,选择变化显著的 3 只小鼠(每组 3 只,即 6 只小鼠)的脊髓组织进行病理学检测。剩余 5 只小鼠(每组 5 只,即 10 只小鼠)依旧隔一周(即 SCI 后 5week、7week、9week)进行 BBB test。分值范围为0-21分,其中0分代表后肢完全失去运动功能,21分代表后肢运动功能基本正常。
2. Mechanical allodynia test (机械触诱发痛检测)
使用 Von Frey 测痛套件,记录缩足的压力(g),2 分钟时间间隔内测量 4 次,剔除最大值和最小值后获取的中间值作为痛阈(g)。
脊髓损伤模型的建立及术后小鼠情况:
所有实验小鼠在打击时均出现痉挛性摆尾,双下肢及躯体回缩扑动,随后双下肢瘫痪,损伤节段脊髓硬膜完整、出血、水肿。所有麻醉后小鼠于术后苏醒,出现双下肢瘫痪,运动、感觉功能丧失,依靠双上肢移动躯体,头颈部活动正常。术后1d,所有小鼠BBB评分均小于1分,活动明显减少,进食、饮水量减少,协助排尿7d后大部分小鼠恢复自主排尿功能。
机械触诱发痛检测:将小鼠置于金属网格的架子上使之适应环境,采用Von Frey丝自足底下方垂直剌激后爪底皮肤表面,能引起阳性缩爪反应所需的最低力度记为缩爪阈值,造模后小鼠的PWTs值较正常小鼠均下降。
组织病理学
3.免疫荧光
药物注射后两周,取受损脊髓组织,石蜡切片后,检测其中 MAP-1 的表达分布。
4.小胶质细胞/ 巨噬细胞检测— 激光共聚焦
药物注射后两周,取受损脊髓组织,石蜡切片后,检测其中 ED1(小胶质细胞/巨噬细胞活化 marker)。
需确认的信息
1. 模型种属(大鼠还是小鼠或是其他种属)
2. 动物体重有无要求,年龄有无要求
3. 雌雄有无要求
4. 模型构建具体方案
5. 取材要求(采血、取组织样本)
晶莱生物服务流程
晶莱生物实验服务项目
动物实验 | 细胞生物学 | 病理实验 |
消化系统模型 | 细胞培养 | 病理染色 |
胃酸分泌模型 | 普通细胞株 | HE染色 |
脓毒症模型 | 细胞缺氧培养 | 油红O染色 |
胃溃疡模型 | 细胞培养+支架 | 番红固绿染色 |
胰腺炎模型 | 干细胞培养 | Masson染色 |
肝纤维化模型 | 原代细胞分离/提取/培养 | 天狼猩红染色 |
DIO肥胖模型 | 细胞转染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
胆结石模型 | Trans well共培养 | 阿利新蓝染色 |
结肠炎(UC)模型 | 细胞增殖 | 甲苯胺蓝染色 |
脂肪肝模型 | 细胞计数 | 尼氏染色 |
急性肝损伤模型 | 生长曲线测定 | LFB髓鞘染色 |
免疫、代谢系统疾病模型 | 存活曲线测定 | 普鲁士蓝染色 |
骨质疏松模型 | ccK-8增殖检测 | VG染色 |
糖尿病模型 | MTT增殖检测 | EVG染色 |
高尿酸血症模型 | CFSE检测增殖-流式检测 | VonKossa染色 |
呼吸系统模型 | BrDU检测-免疫荧光法 | 刚果红染色 |
肺纤维化模型 | 细胞凋亡 | 苏丹黑B染色 |
慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式检测细胞凋亡 | Trap染色 |
急性肺损伤模型 | WB检测凋亡相关蛋白 | 抗酸染色 |
哮喘模型 | 透射电镜观察凋亡小体 | 革兰氏染色 |
肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB显色) | AB-PAS染色 |
支气管炎模型 | Tunel(荧光法,含试剂盒) | 亚甲基蓝染色 |
泌尿生殖系统模型 | DNA ladder法 | 苯胺蓝染色 |
慢性肾衰模型 | 细胞周期 | 荧光 DAPI染色 |
急性肾衰模型 | 细胞显微计数 | 普鲁士蓝染色 |
肾间质纤维化模型 | PI染色 | 间苯二酚碱性品红染色 |
肾结石模型 | BrdU渗入法 | 银染 |
肾炎模型 | 免疫荧光染色 | 黑色素染色 |
子宫内膜异位症模型 | PI流式检测细胞周期 | 镀银染色 |
心血管系统模型 | 细胞运动 | PASM 六胺银染色 |
冠心病模型 | Transwell检测细胞迁移 | VG染色 |
心肌梗死模型 | Transwell检测细胞侵袭 | 富尔根染色 |
心脏骤停模型 | 细胞划痕 | 亚甲基蓝染色 |
慢性心力衰竭模型 | 细胞克隆 | 碘-碘化钾染色 |
动脉粥样硬化模型 | 集落形成法/稀释铺板方法 | Goldner三色法染色 |
白血病模型 | 软琼脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
高血压模型 | 毛细管克隆法 | 改良苯酚品红染色 |
神经系统模型 | 体外实验血管生成 | 网状纤维染色 |
脑卒中模型 | 磁珠分选细胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
栓塞性脑梗死模型 | 流式分选细胞 | 镀银染色 |
脑出血模型 | 开机费 | movat五色染色 |
脑损伤模型 | 单色 | 维多利亚蓝染色 |
脊髓损伤模型 | 双色 | 免疫组化 |
帕金森模型 | CBA多细胞因子流式检测 | 免疫组化预式 |
老年痴呆模型 | 组织/血液细胞制备 | 免疫组化正式 |
应激模型 | 组织单细胞制备 | 免疫荧光(石蜡-单标) |
骨骼疾病模型 | 中性粒细胞提取 | 免疫荧光(石蜡-双标) |
骨折模型 | 其他样本细胞制备(如血液等) | 免疫荧光(石蜡-三标) |
骨缺损模型 | 外周血PBMC分离 | 免疫荧光(冰冻-单标) |
风湿免疫性关节炎模型 | 线粒体组学 | 免疫荧光(冰冻-双标) |
骨关节炎模型 | 线粒体膜电位检测-流式法 | 制片前处理 |
五官疾病模型 | 线粒体膜电位检测-免疫荧光法 | 石蜡组织包埋 |
眼科疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--流式 | 特殊包埋(细胞、材料、眼球等) |
鼻腔疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光 | 软化(肝硬化、皮肤结痂、植物等) |
皮肤疾病模型 | 线粒体通透性转换孔(mPTP) | 骨组织脱钙(小) |
皮肤损伤模型 | 溶酶体免疫荧光法 | 骨组织脱钙(大) |
肿瘤疾病模型 | 线粒体+溶酶体共定位 | 骨组织EDTA脱钙(小) |
原位瘤模型 | 内质网 | 骨组织EDTA脱钙(大) |
转移瘤模型 | 线粒体钙瞬时变化检测-流式 | 石蜡白片 |
皮下植瘤模型 | ATP检测 | 细胞爬片 |
ADP检测 | ||
AMP检测 | ||
流式 | DNA/RNA半定量检测 | 基因编辑工具 |
组织细胞悬液处理 | pcr检测mRNA | 合成(3保1)片段/质粒/引物合成 |
细胞处理 | microRNA检测 | 质粒载体构建 |
血液标本处理 | LncRNA表达量的检测 | 过表达腺病毒载体构建包装 |
细胞刺激培养 | CirRNA表达量的检测 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
单色检测 | 凝胶电泳 | 过表达慢病毒载体构建包装 |
双色检测 | 基因合成 | shRNA慢病毒载体构建包装 |
Annexin V/PI凋亡 | <300 | 过表达腺相关病毒载体构建包装 |
细胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
1500 - 5000 | 稳转细胞株 | |
>5000 | ||
特殊序列 | ||
ELISA | WB | qPCR |
组织匀浆处理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
ELISA(不含试剂盒)48T/kit | WB检测一(10孔膜/指标) | mRNA引物设计及合成 |
ELISA(不含试剂盒)96T/kit | 灰度值分析及作图一(10孔膜/指标) | miRNA引物设计及合成 |
ELISA(含国产试剂盒)48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物设计及合成 |
ELISA(含国产试剂盒)96T/kit | WB检测二(10孔膜/指标) | CircRNA引物设计及合成 |
灰度值分析及作图二(10孔膜/指标) | mRNA RT-qPCR | |
miRNA RT-qPCR | ||
LncRNA RT-qPCR | ||
CircRNA RT-qPCR |
收费标准/服务周期/提供结果:
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