老年痴呆模型

AD阿尔兹海默症模型
原型物种：人

来源：物理方法和药物

模式动物品系：SPF级SD大鼠，健康，雄性，体重为250g-300g。

实验分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

实验周期：4-6 weeks

建模方法
SD大鼠均采用1%戊巴Bi妥钠40μg/g腹腔内注射麻醉，麻醉后继而固定于脑立体定位仪上。按照大鼠脑立体定位图谱，以前囟为零起点，前囟后3.5 mm处为穿刺点，中线右侧旁开2mm，而后牙科钻钻开颅骨，采用微量注射器自脑表面垂直进针3mm，即：(AP= -3.5 mm, ML=2.0 mm, DV=3.0 mm)，双侧海马CA1区缓慢匀速注射Aβ1-40各10 μg (1 μL)，留针5 min，退针后缝合伤口。造模后3d后，开始尾静脉注射，注射生理盐水，大鼠每只给药100μl/次/d，连续给药21d后，进行水迷宫行为学检测。



模型评价
行为学检测：所有组别，于给药后21d，进行Morris水迷宫试验，试验分为定位航行实验和空间探索实验。
1. 定位航行实验：大鼠连续接受5天的训练，每天4次，每次时间间隔30min，记录下大鼠从4个入水点和入水并找到平台所需要的时间，即逃避潜伏期。4次潜伏期的平均成绩作为当日的最终结果进入到最后统计。
2. 空间探索实验：实验的第6天，撤去平台，从距离平台的最远端入水后，将大鼠放入水中，记录下30s内大鼠的游泳轨迹，并观察分析大鼠在目标象限的停留时间，以及它的穿越平台的次数。
行为学结束后，将各组大鼠摘取全脑，冰上剥去小脑，将剩余部分左右对切，一半放入4%多聚 J 醛中固定，用于病理学检测。另一半取海马用于PCR和蛋白检测。



组织病理学
1. 尼氏染色海马组织固定后石蜡切片，进行尼氏染色，观察海马区神经细胞形态和数量。光学显微镜下，计数视野下每组大鼠同一部位的神经元数量，作统计分析。
2. 免疫荧光染色免疫荧光染色，观察海马区Aβ1-40染色情况。荧光显微镜下，计数视野下每组大鼠同一部位的阳性斑块数量，作统计分析。
3. TUNEL染色海马组织进行TUNEL染色，观察神经元凋亡情况。荧学显微镜下，计数视野下每组大鼠同一部位的阳性染色数量，作统计分析。

标志因子水平
1. RT-qPCR检测收集海马组织，提取RNA，反转录cDNA，PCR检测caspase-3，Bcl-2和Bax的表达。
2. Western-blot检测收集海马组织蛋白，检测active-caspase-3，Bcl-2和Bax的蛋白表达。

血管性痴呆模型
永久性结扎双侧颈总动脉大鼠于实验前 12 h 开始禁食,不禁水。 麻醉后将大鼠固定于实验台上,消毒后沿颈正中线切开皮肤约 4~5 cm,暴露并分离出双侧颈总动脉,此时需注意避免损伤迷走神经,永久性结扎双侧颈总动脉。 若有对照组,则对照组大鼠只分离双侧颈总动脉而 不 结 扎, 术 后 缝 合 皮 肤、 消 毒 并 应 用 抗 生素。 有研究将此法改良为分次进行的永久性结扎双侧颈总动脉,即先结扎一侧颈总动脉,3 ~ 7 d后再行结扎对侧颈总动脉。 由于大鼠侧支循环具有个体差异性,因此结扎颈总动脉后所造成的卒中严重程度不同,脑血流量严重不足时可导致大鼠死亡。 改良后的手术方法结扎一侧颈总动脉后通过大脑侧支循环逐步代偿后再行结扎对侧颈总动脉,不至于使脑血流量骤然减少导致大鼠死亡。 该方法提高了大鼠存活率,但目前应用较少,还需重复验证该方法的稳定性及可靠性。

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