时间：2021-09-26浏览次数：2332
【晶莱生物】实验技术简介：
Hoechst染料都可在350nm左右的紫外光激发。都在461nm处发出蓝靛色荧光光。Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发后发出蓝色荧光。
【晶莱生物】实验技术原理：
Hoechst是可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较 低。 荧光染料Hoechst能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst比正常细胞的多，荧光强度 要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不 能有效地将Hoechst排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。
【晶莱生物】实验操作流程：
1、可贴壁细胞生长于含有盖玻片的培养皿中,或将非贴壁细胞悬浮培养；
2、将HOECHST加入培养皿,终浓度为10ug/ml,37℃孵育30min；
3、加入4%PF,与培养液1:3混合,固定细胞5-10min；
4、固定后将长有细胞的盖玻片用封片剂封于载玻片；
5、荧光显微镜下观察。
客户提供：
1、组织样品：新鲜组织放入液氮或-80度保存，组织不少于100mg；
2、培养细胞：通过细胞计数取不少于2×106个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱（-80℃，避免反复冻融）；
3、血液细胞标本：以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，保存（-80℃可长期保存，避免反复冻融）；
4、血清或细胞培养液标本：离心去掉杂质后取上清入EP管，保存（4℃可保存15-20天，-80℃可长期保存，避免反复冻融）；
5、石蜡切片，冰冻切片以及细胞爬片，涂片等。
6、样本运输：可选择以下任何一种方式寄送标本
- 组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后，加冰袋寄送；
- 细胞样本也可直接寄送培养瓶（密封保证不污染、培养液不漏出）；
- 血清或上清液直接加冰袋寄送（送视路程远近2-3天可到达）。
交付标准：
1、图片；
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）。
其他：
1、Hoechst能与DNA结合，干扰DNA复制和细胞分裂，因此有致畸和致癌危险。使用和废弃需谨慎。
2、对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
3、荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
晶莱生物病理类实验服务总览表
| 类别 | 服务项目 | 备注 | 说明 |
| 制 片 前 处 理 | 石蜡包埋 | 包埋1块 | 固定后组织按客户要求取材，脱水，包埋成蜡块（进口石蜡） |
| 特殊包埋（细胞、材料、眼球等） | 包埋1块 | 包埋要求难度较高(含特殊位置取材) | |
| 石蜡组织芯片 | 阵列点位包埋 | 客户提供供体蜡块及标本信息 | |
| 软化（肝硬化、皮肤结痂、植物等） | 1块标本软化 | 较为坚硬组织软化处理 | |
| 骨组织脱钙（小） | 1块标本脱钙 | 最大面≤2cm²骨组织脱钙 | |
| 骨组织脱钙（大） | 1块标本脱钙 | 最大面＞2cm²骨组织脱钙 | |
| 骨组织EDTA脱钙（小） | 1块标本脱钙 | 最大面≤2cm²骨组织EDTA脱钙 | |
| 骨组织EDTA脱钙（大） | 1块标本脱钙 | 最大面＞2cm²骨组织EDTA脱钙 | |
| 石蜡白片 | 石蜡白片1片 | 组织防脱载玻片石蜡白片 | |
| 冰冻组织制备 | 冰冻包埋及前处理 | 4%多.聚.甲.醛固定的组织或OCT包裹的新鲜组织（-80℃或液氮内保存，干冰运输） | |
| 冰冻切片 | 冰冻组织切片1片 | 同一组织连续切片3张以上免制备费 | |
| 染 色 | HE染色 | 染色含切片 | 苏木.精-伊红染色法，观察组织形态 |
| 油红O染色 | 染色含冰冻切片 | 4%多.聚.甲.醛固定，冰冻切片。对组织内脂质（如脂滴）染色 | |
| 番红O固绿染色 | 染色含切片 | 常用于植物、软骨组织形态染色 | |
| Masson染色 | 染色含切片 | 观察组织纤维化和肌纤维的鉴别及组织纤维化程度 | |
| 天狼猩红染色 | 染色含切片 | 观察组织纤维化程度，及偏振光进行胶原亚型的分区 | |
| PAS糖原染色 | 染色含切片 | 观察肝脏、肌肉等组织内糖原的变化；肠胃肺支气管等杯状细胞酸性粘液物质变化 | |
| 阿利新蓝染色 | 染色含切片 | 常用于软骨组织或早幼粒细胞、巨核细胞染色 | |
| 甲苯.胺蓝染色 | 染色含切片 | 观察软骨组织形态或组织内肥大细胞的数量及分布 | |
| 尼氏染色 | 染色含切片 | 观察脑或脊髓等中枢神经系统内神经元尼氏体的变化 | |
| LFB髓鞘染色 | 染色含切片 | 观察神经髓鞘的形态及变化 | |
| 普鲁士蓝染色 | 染色含切片 | 常用于吞噬细胞内铁粒子的含量和定位 | |
| VG染色 | 染色含切片 | 显示组织胶原纤维及肌纤维的形态及变化 | |
| EVG染色 | 染色含切片 | 观察血管弹性纤维的形态及变化 | |
| VonKossa染色 | 染色含切片 | 观察组织内病理性钙沉积情况 | |
| 刚果红染色 | 染色含切片 | 一般用于组织淀粉样变染色 | |
| 维多利亚蓝染色 | 染色含切片 | 用于弹力纤维染色 | |
| 免疫 组化 | 免疫组化预式 | 染色含切片 | 试两个一抗浓度后拍照 |
| 免疫组化正式 | 染色含切片 | 客户提供一抗，常用二抗公司提供 | |
| 免疫组化芯片 | 染色含切片 | 免疫组化组织芯片染色 | |
| 免疫荧光（石蜡-单标） | 染色含切片和拍照 | 需实验前商定拍照倍数及视野 | |
| 免疫荧光（石蜡-双标） | 染色含切片和拍照 | 需实验前商定拍照倍数及视野 | |
| 免疫荧光（冰冻-单标） | 染色含冰冻切片和拍照 | 需实验前商定拍照倍数及视野 | |
| 免疫荧光（冰冻-双标） | 染色含冰冻切片和拍照 | 需实验前商定拍照倍数及视野 | |
| 抗体代购 | 详情请咨询工作人员 | ||
| Tunel | Tunel(POD自带试剂盒) | 染色含切片 | 细胞凋亡染色，客户需提供Tunel试剂盒 |
| Tunel(公司提供试剂盒) | 细胞凋亡染色，公司提供罗氏POD Tunel试剂盒 | ||
| 凋亡试剂盒代购 | 染色含切片 | 详情请咨询工作人员 |
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