网状纤维染色银染实验服务

实验技术简介：网状纤维（reticular fiber）网状纤维在疏松结缔组织中含量较少，纤维较细，有分支，彼此交织成网状。用浸银法可将纤维染成黑色，故又称嗜银纤维 （argyrophilic fiber）。电镜观察，网状纤维具有等间距的横纹结构，其化学成分也是胶原蛋白，和胶原纤维相似。网状纤维的嗜银性是由于包在原纤维上的糖蛋白所致。

实验技术原理：氨银液被组织吸咐与组织中的蛋白结合，经甲醛还原成黑色的金属银沉积于组织内及表面。用氯化金调色后，再用硫代硫酸钠液洗去未还原的银盐，从而将组织内的网状纤维清晰地显示出来。

实验操作流程：
1、切片脱蜡至水，蒸馏水洗，
2、用0.5%高.锰.酸.钾氧化5min，
3、自来水洗，继用蒸馏水洗，
4、用2%草酸漂白切片2min，
5、自来水洗，蒸馏水洗，
6、2%硫酸铁铵媒染5min，
7、水洗，蒸馏水洗，
8、滴入氨性银溶液浸染3-5min，
9、蒸馏水洗数次，
10、10%甲醛液还原5-10min，
11、水洗2min，
12、用核固红染色10-15min，
13、水洗10min，各级酒精脱水，
14、常规透明，中性树胶封固。
结果：网状纤维黑色，核红色，胶原纤维黄棕色。

实验注意事项：

客户提供：

1、组织样品：新鲜组织放入液氮或-80度保存，组织不少于100mg；
2、培养细胞：通过细胞计数取不少于2×10⁶个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱（-80℃，避免反复冻融）；
3、血液细胞标本：以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，保存（-80℃可长期保存，避免反复冻融）；
4、血清或细胞培养液标本：离心去掉杂质后取上清入EP管，保存（4℃可保存15-20天，-80℃可长期保存，避免反复冻融）；
5、石蜡切片，冰冻切片以及细胞爬片，涂片等。
6、样本运输：可选择以下任何一种方式寄送标本
     ① 组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后，加冰袋寄送；
     ② 细胞样本也可直接寄送培养瓶（密封保证不污染、培养液不漏出）；
     ③ 血清或上清液直接加冰袋寄送（送视路程远近2-3天可到达）。

交付标准：
1、图片；
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）。

其他：
1、所使用的玻璃仪器，须用清洁液处理。
2、配制氨银溶液时，氨.水加入的量不能过多或不足，过多感应下降，会使液体过碱，滴染时，切片容易脱落，过少则感应上升，浸染效果不佳，不好掌握。
3、配制氨银液时，有可能用玻璃蒸馏水。
4、使用的化学试剂应尽量用分析纯以上。
5、切片氧化漂白应彻底，不能使残存的福尔马林留于片上，否则将导致过早还原而使浸染不均匀。
6、如果有某种原因而导致切片脱落时，应使用涂胶的载片，以增加附贴性。
7、如有可能，氨银溶液以新配为佳，但也可保存于4℃冰箱中达一个月左右，这种液体易挥发，用后即须盖紧，当沉淀物出现时，该溶液应抛弃。
8、应秀氯化金调色时，可将胶原纤维着染的黄棕色去除掉。

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