亢甲状腺药物诱导的甲减模型

甲状腺功能减退症( 甲减) ，指血清甲状腺激素水平低于正常范围，是一种常见的内分泌疾病。甲状腺激素不仅在中枢神经系统的发育成熟和功能维持中起重要作用，而且参与高级认知功能。研究发现，甲减可引起认知功能减低、学习记忆能力下降，更被认为是痴呆的一种危险因素。本研究通过抗氧化剂和甲状腺激素联合治疗观察甲减模型大鼠学习记忆能力、空间探索能力的改善，通过氧化应激及抗氧化应激相关指标超氧化物歧化酶( superox-ide dismutase，SOD ) 和 丙 二 醛( malondialdehyde，MDA) 的变化，阐述抗氧化剂对甲状腺功能减退大鼠抗氧化应激能力的改善。　

实验方法
1.采用成年清洁级 Sprague-Dawley 雄性大鼠 60只( 190 ± 15) g，购自安徽医科大学实验动物中心( 生产许可证号 2011-002) 。饲养环境: 标准鼠笼分笼饲养，每笼 5 只，自由摄食饮水，自然光照，温度( 23 ±2) ℃，相对湿度( 45%～ 50%) 。所有大鼠适应性饲养 7 d 后随机预留 10 只作对照组，正常饮水，其余 50 只纳入实验诱导甲减模型，饮用水中加入含有 0． 05% ( W/V) 丙硫氧嘧啶( propylthiouracil，PTU) ，每周称取大鼠体质量。4 周后，模型组大鼠出现行动迟缓、反应迟钝、饮食饮水量较前减少，体质量增加缓慢，随机选取 10 只，经腹主动脉取血检测甲状腺功能。　　

2.甲减模型建成后，除对照组外，将 40 只甲减大鼠随机分为 4 组进行干预治疗。包括: 甲减组( PTU组) 、硫辛酸( lipoic acid，LA) 组( PTU + LA 组) 、左甲状腺素钠( levothyroxine sodium，L-T4) 组( PTU +L-T4 组) 、联合用药组( PTU + L-T4 + LA 组) 。每天8∶ 00 PTU + L-T4 + LA 组、PTU + L-T4 组按 0． 02 μg /g L-T4 灌胃，其余各组按等量生理盐水灌胃; 18∶ 00PTU + LA 组和 L-T4 + LA 组按 120 mg / kg LA 灌胃，其余各组按等量生理盐水灌胃。连续 4 周，期间除对照组饮用消毒无菌水外其余各组继续饮用0． 05%( W/V) PTU 水。

3.药物干预 3 周后所有大鼠行 Morris 水迷宫行为学测试，检测大鼠认知及记忆能力。实验期间，室内光照尽量保持一致，迷宫周围物品及空间线索保持固定不变。实验内容包括: ①适应性训练: 实验前3 d每天让动物在无安全平台的水中适应性游泳;②定位航行实验: 实验历时 5 d，每天下午将大鼠面向池壁，分别从 4 个入水点放入水中，记录大鼠在120 s内找到平台的时间 ( 逃避潜伏期 ) ，如果在120 s内未找到平台，潜伏期记为 120 s，由操作者帮助大鼠找到平台，并在平台中央停留 10 s，实验后将大鼠放回笼中; ③空间探索实验: 第 6 天撤去平台，将大鼠由任一入水点下水，记录 120 s 内大鼠穿越平台所在象限的时间、平均速度和总路程及穿越平台所在区域的次数。

4.各组大鼠按每 100 g 体质量 10% 水合氯.醛0． 3 ml 麻醉，仰卧固定在手术板上，常规消毒，腹部正中切口，经腹主动脉取血，普通离心机 3500 r/min离心后取上层血清分为两份，一份于 4℃ 冰箱保存待测三碘甲腺原氨酸( triiodothyronine，T3) 、甲状腺素( thyroxine，T4) 、促甲状腺素( thyrotropin，TSH) ，另一份于 －20℃冰箱保存待测 SOD、MDA。大鼠取血后断头处死，迅速在冰盘上剥去颅骨后，以打孔方式( 15 gauge) 取出海马组织，以 4℃预冷的生理盐水洗去余血，置于液氮中冷冻，保存于 － 80℃ 低温冰箱。检测海马组织相关指标时，取出海马组织，准确称量后按 1∶ 9( W/V) 比例在 0． 9% 生理盐水中匀浆制成 10%海马组织匀浆悬液，用于海马组织 SOD、MDA 的测定。　

需确认的信息
1. 模型种属（大鼠还是小鼠或是其他种属）
2. 动物体重有无要求，年龄有无要求
3. 雌雄有无要求
4. 模型构建具体方案
5. 取材要求（采血、取组织样本）