【五分钟讲实验】样本保存不当=实验白做？这些要点要记牢！
时间：2026-02-24 阅读：102
“熬了3个通宵采集的样本，结果因为保存失误，数据完全无效？”
在实验室里，这样的“崩溃瞬间”并不少见。很多科研人专注于实验设计、操作精准度，却容易忽略“样本保存”这个关键环节——要知道，生物样本（血液、组织、细胞等）就像实验的“原材料”，哪怕前期操作再完美，只要保存环节出了纰漏，后续的检测、分析都可能沦为“无用功”。
今天就来拆解样本保存的核心逻辑：那些让实验“功亏一篑”的坑，其实都能提前规避；掌握这些要点，才能让样本真正发挥科研价值。
先搞懂：为什么样本保存不能“随便来”？
生物样本的特殊性，决定了它对保存条件的“高要求”：
血液样本中的血清、血浆含有蛋白质、核酸等生物活性物质，室温放置过久会导致蛋白降解、溶血，直接影响检测结果；组织样本若未及时固定或低温处理，细胞会快速凋亡，后续的病理分析、分子实验都会失真；细胞样本更是“娇贵”，冻存速率不当、保护剂浓度失衡，都会导致细胞活性骤降，甚至全军覆没。
更关键的是，样本一旦受损往往无法逆转——你可能以为只是“保存方式有点问题”，但最终呈现的实验数据会出现偏差，轻则需要重新采集样本、延误项目进度，重则导致整个研究方向出错，前期投入的时间、人力、经费全部白费。
所以说，样本保存不是“后续步骤”，而是贯穿实验全程的“关键防线”，直接决定了科研数据的准确性和可靠性。
避坑指南：样本保存的4个核心要点
1. 处理：规范处理流程，优化样本制备
样本处理是保存的核心前提，核心目标是在样本采集后，通过规范操作最大程度保留生物活性物质（蛋白、核酸等）和样本原有特性，避免预处理环节造成的损耗。
① 动物组织样本：动物处死后行心间取血，尽量将血液去除干净，取下合适组织样品装入 EP 管；若动物血液去除不干净，可用预冷的 PBS 或者生理 盐水漂洗尽量除尽残留血液，用滤纸把多余 PBS 吸取干净，然后将组织装入 EP 管，做好 标记，于-80℃或者液氮中保存。
② 细菌样本：细菌培养完成后，10000rpm 离心 5min 收集细菌，加入 PBS 吹打，10000rpm 离心 5min ， 弃去上清，于-80℃或者液氮冻存待用。
③ 血清：室温血液自然凝固 10-20 min后，离心 20 min左右（2000-3000 rpm/min）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
④ 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 10-20 min后，离心 20 min左右（2000-3000 rpm/min）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
⑤ 尿液：用无菌管收集。离心 20 min左右（2000-3000 rpm/min）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
⑥ 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。贴壁细胞可以直接收集上清，悬浮细胞离心（1200 rpm，3min）后仔细收集上清。
2. 控温：抢抓黄金时效，严控室温暴露
不同样本的“耐受度”不同，但核心原则一致：尽快低温处理，减少室温停留时间。维持样本活性与特性。
① 冻存时机：处理后的样本需尽快启动冻存，细胞样本离心收集后 30 min内必须加入冻存液；血液、组织样本处理完成后不宜久置，立即转入低温环境。
② 冻存环境：动物组织、细菌等样本需存入 - 80℃冰箱或液氮中，确保低温稳定性，杜绝温度波动导致的样本损伤。
3. 防损：做好分装冻存，规范冻切取用
样本的“生命力”经不起折腾——反复冻融会导致生物大分子（蛋白、核酸）降解，细胞活性急剧下降，哪怕只冻融2次，也可能让样本失去研究价值。
如何规避？
① 分装冻存：将处理好的样本按实验需求分成小份（如0.5-1mL/管），每次实验取用1管，避免整份样本反复解冻；若样本量较少（不足0.5mL），可加入适量无酶PBS或对应冻存液稀释至标准分装体积，方便后续取用和检测。
② 从 - 80℃/ 液氮取出样本，置于干冰上保持冻存状态；快速切取的组织块，减少样本暴露在常温的时间；切取工具需预冷，避免局部解冻；剩余样本立即放回，避免温度回升；需更新标签（标注取用日期）。
4. 追溯：确保标签清晰，完善存档记录
样本保存不仅要“保活性”，还要“可追溯”——很多实验室出现“样本混淆”“找不到对应样本”的问题，根源就在于标签和存档管理。
① 标签规范：使用耐低温、防脱落的标签，或者管外侧用马克笔标记清楚样本编号；
② 存档管理：样本信息需完整登记，为每份样本匹配专属样本单。明确标注样本编号、来源、类型、取材日期、冻存日期以及其他信息。
重点提醒：这些“小细节”别忽视
1. 个人防护：处理生物样本时，需佩戴手套、口罩、防护服，在生物安全柜内操作，避免样本污染和人员感染；
2. 设备巡检：超低温冰箱需确认每日温度正常，液氮罐液位每周补充至≥2/3，发现设备故障立即转移样本；
3. 废弃物处理：受损、过期的样本需按《生物废弃物处理规范》处置，避免污染环境。
样本是科研的“基石”，保存得当才能让每一次实验都有意义。与其等到实验失败才追悔莫及，不如从一开始就规范操作——记住这些要点，让你的样本真正发挥价值，让科研之路少走弯路～
常见问题 QA：解决你的实操困惑
Q1：样本冻存后出现沉淀，还能使用吗？
A：先判断沉淀类型 —— 血清 / 血浆样本的少量沉淀可能是蛋白析出，可再次2000-3000 转 / 分离心 20 min，取上清继续使用；若沉淀较多或伴随浑浊、溶血，可能是样本降解，不建议用于关键实验。
Q2：不同生物样本的最长保存时限是多久？
A：-80℃冰箱保存下，血清 / 血浆可存 6-12 个月，组织样本可存 1-3 年，细菌 / 细胞样本可存 3-5 年；液氮保存时限更长（组织 / 细胞可达 5 年以上），但需确保温度稳定，避免反复升温。
Q3：没有预冷的 PBS，能用常温的替代吗？
A：不建议。常温 PBS 会让低温保存的组织 / 细胞快速升温，导致生物活性物质降解，尤其是组织样本，可能影响后续提取结果，尽量提前将 PBS 置于 4℃冰箱预冷备用。
Q4：样本冻切时，工具预冷有什么好方法？
A：可将解剖刀、镊子等工具提前放入 - 80℃冰箱冻存 30 min，或在干冰上放置 10 min；操作时全程在干冰旁进行，避免工具回温导致样本局部解冻。
Q5：存档记录需要包含哪些关键信息，才能避免混淆？
A：核心信息缺一不可：样本编号（唯一标识）、样本来源（如 “小鼠肝脏”“患者血清”）、采集日期、处理时间、冻存日期、保存位置（如 “-80℃冰箱 A 区 2 层”）、操作人员，建议用电子表格同步存档，方便检索。
科研人必备收藏 样本是科研的 “基石”，保存得当才能让每一次实验都有意义。与其等到实验失败才追悔莫及，不如从一开始就规范操作～
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