【五分钟讲实验】结直肠癌动物模型构建详解！

在2021-2024年国自然的中标项目中结直肠癌项目资助项目681个，总计金额2.7亿，说明国家对结直肠癌研究的重视程度也逐年加强。

结直肠癌（colorectal cancer  CRC）结肠直肠癌中国在世界上属于低发地区，但其发生率在不少地区有程度不等的增加趋势。本病多发生在中年以上的男性，以40～70岁最为多见，但20世纪末发现30岁以下者亦不少见。男女两性发病比例约为2:1。本病和其他恶性肿瘤一样,发病原因仍不清楚,可以发生在结肠或直肠的任何部位,但以直肠、乙状结肠最为多见，其余依次见于盲肠、升结肠、降结肠及横结肠。癌瘤大多数为腺癌，少数为鳞状上皮癌及粘液癌。

1.  实验材料

① 实验动物：Balb/c （雌性，6-8周龄）；

② 细胞：CT26；

③ 器械：一次性注射器、酒精棉球。

2. 操作方法

① 检查培养的CT26细胞的形态和增殖情况。当细胞达到足够数量并保持活跃状态时，可以进行接种前的准备工作。洗涤细胞以去除培养基中的残留物，使用细胞计数仪检查细胞的数量和活力。 

② 当细胞活性在90%以上，数量达到5*10^6时，使用PBS或无血清培养基重悬，放置在含碎冰的泡沫盒中，保持活性，等待接种。 

③ 接种前，用剃毛器剃除小鼠侧腹部皮肤，以便接种细胞。 

④ 混匀细胞，混细胞时缓慢轻柔，尽量不要出现气泡；准备一个湿棉球和一个半干棉球，调整注射器针头剖面与刻度的位置，缓慢抽入计算好体积的细胞（排气泡时动作要轻柔），用半干棉球擦拭注射器针头；左手保定小鼠，暴露待接种的部位，并用湿棉球擦拭消毒；右手持注射器，剖面向上进针刺入小鼠皮下，进针长度约为针头的1/3，随后小幅度摆动注射器针头，钝性分离皮下的结缔组织，右手拇指缓慢推入计算好的细胞体积，这时，接种部位会出现圆形隆起，停顿两秒，旋转针头使剖面向下顺势拔出针头。每接种完一笼小鼠需要更换注射器，更换棉球，对双手以及工作台面擦拭消毒。 

⑤ 在接种后，定期监测动物的健康状况和肿瘤生长情况。记录肿瘤的体积、生长速度和其他相关参数，以便后续研究和分析。

1.  实验材料

① 实验动物：Balb/c （雌性，6-8周龄）；

② 细胞：CT26；

③ 器械：一次性注射器、酒精棉球、麻醉剂、缝合针、线。

2. 操作方法

① 检查培养的CT26细胞的形态和增殖情况。当细胞达到足够数量并保持活跃状态时，可以进行接种前的准备工作。洗涤细胞以去除培养基中的残留物，使用细胞计数仪检查细胞的数量和活力。 

② 当细胞活性在90%以上，数量达到5*10^6时，使用PBS或无血清培养基重悬，放置在含碎冰的泡沫盒中，保持活性，等待接种。 

③ 接种前，用剃毛器剃除小鼠腹部皮肤，以便接种细胞。 

④ 麻醉小鼠后，在前肢与后肢中线靠后肢1/3处，用75%酒精棉球擦拭，观察到暗色的脾脏，剪开皮肤和肌肉层，用镊子轻轻将脾脏提出，靠近下缘2mm位置，针面朝上，慢慢推入细胞，可见脾脏被摸肿胀，颜色变稍白。 

⑤ 缓慢退针，将脾脏放回腹腔，依次缝合肌肉层及皮肤。

3. 模型评价

1. 注意事项

① 接种前细胞活率要在90%以上，成功率高。

② 皮下进针要深一点，缓慢推针，防止漏液 退针时要旋转退针，防止细胞随针头带出，导致肿瘤成型不规则。

2. 风险评估

① 要确定细胞来源种属，鼠源一般接种与Balb/c，人源细胞建议接种在裸鼠。 

② 有些细胞系本身难成瘤，建议根据细胞系选择免疫缺陷更严重的动物进行荷瘤。

③ 对一些难成瘤的细胞，可以选择混基质胶提高他的成瘤率。