晶莱生物之抗体搜索与选择

细胞凋亡是生物体中一种普遍存在的现象，与胚胎形成、个体发育、衰老和损伤细胞的清除等密切相关。

细胞凋亡过程可分为早期凋亡（细胞膜结构发生改变，磷酯酰丝氨酸外翻）、早中期凋亡（细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色素c）、中晚期凋亡（细胞凋亡的信号转导）、晚期凋亡（DNA降解为180-200bp片断）。

检测细胞凋亡的方法很多，如形态学观察、DNA－ladder电泳等。而流式细胞术是检测细胞凋亡非常重要的方法，不仅可以定性，而且可以定量。

⑴Annexin V /PI双染色法检测早期凋亡. Annexin V是一种钙依赖性的磷酯酰丝氨酸(PS)结合蛋白，Annexin V可以特异性地识别凋亡细胞表面的PS, 而不能透膜识别活细胞的PS。所以可以用FITC偶联的annexin V鉴别凋亡细胞和活细胞。PI染料能够通过坏死细胞的细胞膜与细胞内的DNA结合, 但早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整，PI染料无法自由通过，所以PI染料无法标记早期凋亡细胞和活细胞。因此Annexin V和PI同时使用，就可以区分活细胞、早期凋亡细胞和坏死细胞。

⑵线粒体膜电位检测早中期凋亡. JC-1是可结合到线粒体基质的亲脂性阳离子荧光染料，正常生理状态下，线粒体负电性高，JC-1进入线粒体以多聚体存在，红色荧光强；细胞凋亡时，线粒体去极化，负电性降低，JC-1则以单体存在，绿色荧光增强。

⑶活化的caspase-3检测. 活化的caspase-3由其前体裂解的一个17KD亚单位和一个12KD亚单位组成，形成异二聚体，可被Anti-Active Caspase-3抗体特异性识别。⑷DNA片段化的检测. 细胞凋亡时染色质发生浓缩, 染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂, 形成180~200bp及其整数倍的寡核苷酸片段。DNA一旦发生片段化，在DNA双链结构上会出现很多缺口，可以使用FITC标记的DUTP或BrdU在酶的作用下掺入到缺口中，然后检测掺入的信号强度，来判断发生片段化的程度。