小鼠结肠类器官

在生物医学研究领域，类器官技术的出现彻底改变了我们对器官发育、疾病机制和药物反应的理解。小鼠胃肠类器官作为这一技术的重要分支，已成为研究胃肠道生物学、疾病建模和药物筛选的强大工具。

取材：首先，将小鼠进行脊椎脱臼处理，使其猝死。然后进行解剖，取出5cm长的直肠上段（靠近胃）和5cm长的直肠下段（靠近盲肠），以及整个结肠（盲肠以下）。

PBS冲洗：用眼科镊捏住肠的一端，用5ml注射器对着肠的开口处冲洗，重复5次，以去除肠内的杂物。

剪段：用眼科剪沿着肠口剪开，然后每隔1cm剪断一段，并将这些段放入15ml离心管中。

冲洗：每次用10ml冰PBS冲洗，重复5次。

肠解离液浸泡：将组织段转移到新的30ml玻璃瓶中，加入10ml肠解离液（OM44），放入4℃冰箱浸泡30分钟，每隔两三分钟摇晃一次。浸泡后，将组织转移到新的10ml冰PBS中清洗一次，然后转移到1.5ml离心管中。

剪碎组织：用眼科剪将组织充分剪碎至0.5mm左右，加入1ml组织消化液（OM41），在37℃恒温震荡器中消化30分钟。消化后，静止2分钟，取10ul观察，如有少量细胞团，再消化10分钟，再次取10ul观察，细胞量充足。

过滤：用70um过滤器过滤细胞液于50ml离心管中，加入5ml冰PBS冲洗过滤器。

检查活性：取100ul细胞液于培养皿中，加入3ul台盼蓝，混匀后观察，细胞应为单个，活性良好。

离心：将细胞液转移到1.5ml离心管中，离心弃上清，留适量液体与细胞进行吹打混匀。

加基质胶：按1:1比例加入基质胶（OM21），用移液枪快速吹打混匀，控制在15秒内，然后放置冰板上。

种板：取10ul细胞液点到96孔板的培养孔中央，铺开不可接触培养孔侧壁，倒置于37℃培养箱放置30分钟。沿孔壁缓缓加入小鼠大肠类器官培养基（OM32），每孔100ul。

观察：在显微镜下观察细胞形态，拍照记录并保存。将孔板放置37℃，5%CO2培养箱中培养，每天观察细胞形态。