流式细胞增殖

流式细胞术是检测细胞增殖的一种重要手段，其优点在于能够实现多荧光指标同时检测，并且可以对混合样本中的特定细胞进行增殖分析，常用CFSE和BrdU法。

技术原理

1、CFSE（CFDA-SE） 是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。CFDA-SE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFDASE在结构上将酚羟基部位改造成AM体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，进入细胞内的CFDA-SE的AM 部位能被细胞内酯酶水解生成CFSE，通过共价结合赖氨酸侧链的氨基而掺入细胞内和细胞表面的蛋白，且结合后发出强的绿色荧光。细胞分裂增殖过程中，它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半。CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞外。CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。

2、BrdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物。它也能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。

实验流程

CFSE：加入CFSE-孵育-洗涤-培养-上机

BrdU：加入BrdU-孵育-洗涤-培养-上机

案例展示