流式细胞增殖

时间:2020-12-03浏览次数:490

流式细胞术是检测细胞增殖的一种重要手段,其优点在于能够实现多荧光指标同时检测,并且可以对混合样本中的特定细胞进行增殖分析,常用CFSE和BrdU法。


技术原理

1、CFSE(CFDA-SE) 是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞。CFDA-SE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料,可以结合细胞内的蛋白质。CFDASE在结构上将酚羟基部位改造成AM体,所以自身不发荧光,荧光背景低,脂溶性高,能够轻易穿透细胞膜,进入细胞内的CFDA-SE的AM 部位能被细胞内酯酶水解生成CFSE,通过共价结合赖氨酸侧链的氨基而掺入细胞内和细胞表面的蛋白,且结合后发出强的绿色荧光。细胞分裂增殖过程中,它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半。CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合,固定在细胞内,不会漏出细胞外。CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核,在细胞核的荧光最强。


2、BrdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物。它也能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。


实验流程

CFSE:加入CFSE-孵育-洗涤-培养-上机

BrdU:加入BrdU-孵育-洗涤-培养-上机


案例展示

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