细胞周期检测

技术原理

流式利用不同荧光物质标记的单克隆抗体，与待测成分作用，然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列，一个个迅速通过激光聚焦区，激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号，利用这些信号，可计算出相对含量，从而得到细胞群的相对比值。

细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能（G0期）。由于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量（2N），而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量（4N），而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此，通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期，S期和G2/M期。 

实验方法

Step1：细胞培养 

Step2：转染或药物处理 

Step3：细胞收集

Step4：加周期试剂 

Step5：上机检测

案例展示

在施加药物后，细胞周期明显阻滞。 

技术总结

1、考虑到进行流式时需要用到对照组细胞设置空白组（用于调节电压）和单染组细胞（用于调节补偿），因此要求该组细胞量较其他组多；

2、如发现细胞密度偏低，细胞量较少，则适当增加离心时间。收集细胞时，应该连同上清一起收集，同时胰酶消化时间不宜过长，否则容易引起假阳性；

3、检测细胞经过转染等处理后可能会带有自发荧光，应注意选择凋亡试剂盒的颜色通道 如：带绿色荧光时，应选择7AAD试剂盒；

4、细胞铺板应选择细胞状态良好的时候进行，且避免因反复吹打形成机械损伤，而出现细胞碎片过多。

送检与交付标准