时间：2021-09-28浏览次数：1224
【晶莱生物】探针是一小段单链DNA或者RNA片段（大约是20到500 bp），用于检测与其互补的核酸序列。双链DNA加热变性成为单链，随后用放射性同位素（通常用磷-32）、萤光染料或者酶（如辣根过氧化物酶）标记成为探针。
| 实验材料 | 基因 |
| 试剂、试剂盒 | 转录缓冲液 DTT RNA酶抑制剂 CTP ATP S-UTP 乙酸铵 乙醇 |
| 仪器、耗材 | 水溶锅 离心机 培养箱 烘箱 |
| 实验步骤 | 1. 在一个含SP6、T3或T7启动子的载体中，插入目的基因。在编码序列下游酶切使质粒呈线性。DNA以酚/氯0仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以无菌水重溶沉淀至1 μg/μl。 2. 室温配罝如下反应混合液（总体积20 μl）： （1）4.0 μl 5×转录缓冲液 （2）0.2 μl 1 mol/l DTT （3）60 U RNA酶抑制剂 （4）1.0 μl 三种10 mmol/l NTP中的每一种 （5）1.0 μl 1 μg/μl 酶切DNA （6）10.0 μl ［35S］UTP （7）16 U SP6或T7 RNA聚合酶 （8）37℃温育30 min，再加16 U聚合酶并于37 ℃温育40 min。 3. 在反应混合液中加入：60 U RNA酶抑制剂，20 μl 10 mg/ml 的载体RNA和1.0 μl 酶1，于37℃温育10 min 以除去摸板。 4. 往反应混合液加入以下液体：0.8 μl 1 mol/l DTT、63 μl 无菌水和10 μl 3 mol/l 乙酸钠，取出1 μl 测定其 cpm/μl 值。 5. 加36.4 μl 7.5 mol/l的乙酸铵于反应混合液（终浓度2 mol/l）加50~100 μg tRNA载体和272 μl 冷无水乙醇，置干冰上沉淀10 min，以冷70%乙醇洗沉淀，晾干，需要的话可重复此步。以100 μl 10 mmol/l DTT重溶DNA沉淀。 6. 确定其 cpm/μl 值，并计算掺入百分比，核糖核酸探针应于2~3天内使用。 （70%到90%的标记掺入，结果可得70~90 ng 标记的RNA）。 |
晶莱生物服务流程
晶莱生物实验服务项目
| 动物实验 | 细胞生物学 | 病理实验 |
| 消化系统模型 | 细胞培养 | 病理染色 |
| 胃酸分泌模型 | 普通细胞株 | HE染色 |
| 脓毒症模型 | 细胞缺氧培养 | 油红O染色 |
| 胃溃疡模型 | 细胞培养+支架 | 番红固绿染色 |
| 胰腺炎模型 | 干细胞培养 | Masson染色 |
| 肝纤维化模型 | 原代细胞分离/提取/培养 | 天狼猩红染色 |
| DIO肥胖模型 | 细胞转染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
| 胆结石模型 | Trans well共培养 | 阿利新蓝染色 |
| 结肠炎(UC)模型 | 细胞增殖 | 甲苯胺蓝染色 |
| 脂肪肝模型 | 细胞计数 | 尼氏染色 |
| 急性肝损伤模型 | 生长曲线测定 | LFB髓鞘染色 |
| 免疫、代谢系统疾病模型 | 存活曲线测定 | 普鲁士蓝染色 |
| 骨质疏松模型 | ccK-8增殖检测 | VG染色 |
| 糖尿病模型 | MTT增殖检测 | EVG染色 |
| 高尿酸血症模型 | CFSE检测增殖-流式检测 | VonKossa染色 |
| 呼吸系统模型 | BrDU检测-免疫荧光法 | 刚果红染色 |
| 肺纤维化模型 | 细胞凋亡 | 苏丹黑B染色 |
| 慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式检测细胞凋亡 | Trap染色 |
| 急性肺损伤模型 | WB检测凋亡相关蛋白 | 抗酸染色 |
| 哮喘模型 | 透射电镜观察凋亡小体 | 革兰氏染色 |
| 肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB显色) | AB-PAS染色 |
| 支气管炎模型 | Tunel(荧光法,含试剂盒) | 亚甲基蓝染色 |
| 泌尿生殖系统模型 | DNA ladder法 | 苯胺蓝染色 |
| 慢性肾衰模型 | 细胞周期 | 荧光 DAPI染色 |
| 急性肾衰模型 | 细胞显微计数 | 普鲁士蓝染色 |
| 肾间质纤维化模型 | PI染色 | 间苯二酚碱性品红染色 |
| 肾结石模型 | BrdU渗入法 | 银染 |
| 肾炎模型 | 免疫荧光染色 | 黑色素染色 |
| 子宫内膜异位症模型 | PI流式检测细胞周期 | 镀银染色 |
| 心血管系统模型 | 细胞运动 | PASM 六胺银染色 |
| 冠心病模型 | Transwell检测细胞迁移 | VG染色 |
| 心肌梗死模型 | Transwell检测细胞侵袭 | 富尔根染色 |
| 心脏骤停模型 | 细胞划痕 | 亚甲基蓝染色 |
| 慢性心力衰竭模型 | 细胞克隆 | 碘-碘化钾染色 |
| 动脉粥样硬化模型 | 集落形成法/稀释铺板方法 | Goldner三色法染色 |
| 白血病模型 | 软琼脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
| 高血压模型 | 毛细管克隆法 | 改良苯酚品红染色 |
| 神经系统模型 | 体外实验血管生成 | 网状纤维染色 |
| 脑卒中模型 | 磁珠分选细胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
| 栓塞性脑梗死模型 | 流式分选细胞 | 镀银染色 |
| 脑出血模型 | 开机费 | movat五色染色 |
| 脑损伤模型 | 单色 | 维多利亚蓝染色 |
| 脊髓损伤模型 | 双色 | 免疫组化 |
| 帕金森模型 | CBA多细胞因子流式检测 | 免疫组化预式 |
| 老年痴呆模型 | 组织/血液细胞制备 | 免疫组化正式 |
| 应激模型 | 组织单细胞制备 | 免疫荧光（石蜡-单标） |
| 骨骼疾病模型 | 中性粒细胞提取 | 免疫荧光（石蜡-双标） |
| 骨折模型 | 其他样本细胞制备（如血液等） | 免疫荧光（石蜡-三标） |
| 骨缺损模型 | 外周血PBMC分离 | 免疫荧光（冰冻-单标） |
| 风湿免疫性关节炎模型 | 线粒体组学 | 免疫荧光（冰冻-双标） |
| 骨关节炎模型 | 线粒体膜电位检测-流式法 | 制片前处理 |
| 五官疾病模型 | 线粒体膜电位检测-免疫荧光法 | 石蜡组织包埋 |
| 眼科疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--流式 | 特殊包埋（细胞、材料、眼球等） |
| 鼻腔疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光 | 软化（肝硬化、皮肤结痂、植物等） |
| 皮肤疾病模型 | 线粒体通透性转换孔（mPTP） | 骨组织脱钙（小） |
| 皮肤损伤模型 | 溶酶体免疫荧光法 | 骨组织脱钙（大） |
| 肿瘤疾病模型 | 线粒体+溶酶体共定位 | 骨组织EDTA脱钙（小） |
| 原位瘤模型 | 内质网 | 骨组织EDTA脱钙（大） |
| 转移瘤模型 | 线粒体钙瞬时变化检测-流式 | 石蜡白片 |
| 皮下植瘤模型 | ATP检测 | 细胞爬片 |
| ADP检测 | ||
| AMP检测 | ||
| 流式 | DNA/RNA半定量检测 | 基因编辑工具 |
| 组织细胞悬液处理 | pcr检测mRNA | 合成（3保1）片段/质粒/引物合成 |
| 细胞处理 | microRNA检测 | 质粒载体构建 |
| 血液标本处理 | LncRNA表达量的检测 | 过表达腺病毒载体构建包装 |
| 细胞刺激培养 | CirRNA表达量的检测 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
| 单色检测 | 凝胶电泳 | 过表达慢病毒载体构建包装 |
| 双色检测 | 基因合成 | shRNA慢病毒载体构建包装 |
| Annexin V/PI凋亡 | ＜300 | 过表达腺相关病毒载体构建包装 |
| 细胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
| 1500 - 5000 | 稳转细胞株 | |
| >5000 | ||
| 特殊序列 | ||
| ELISA | WB | qPCR |
| 组织匀浆处理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
| ELISA（不含试剂盒）48T/kit | WB检测一（10孔膜/指标） | mRNA引物设计及合成 |
| ELISA（不含试剂盒）96T/kit | 灰度值分析及作图一（10孔膜/指标） | miRNA引物设计及合成 |
| ELISA（含国产试剂盒）48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物设计及合成 |
| ELISA（含国产试剂盒）96T/kit | WB检测二（10孔膜/指标） | CircRNA引物设计及合成 |
| 灰度值分析及作图二（10孔膜/指标） | mRNA RT-qPCR | |
| miRNA RT-qPCR | ||
| LncRNA RT-qPCR | ||
| CircRNA RT-qPCR |
收费标准/服务周期/提供结果：
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