EMSA

时间:2018-10-30浏览次数:1710

实验意义

EMSA是转录因子研究的经典方法。今年来基因分子生物学研究领域的趋势之一是从基因结构和功能分析转向基因顺式作用元件和反式作用因子(转录因子)及其转录调控机制上,对基因转录调控的研究是表观遗传学和功能基因组学的热点。


实验原理及流程

凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)是一种检测DNA序列和蛋白质相互作用的技术。将纯化的蛋白与细胞粗提液以及同位素标记的DNA或者RNA探针一同孵育,然后通过非变性的聚丙烯凝胶电泳分离核酸-蛋白质复合物以及未结合的探针,核酸-蛋白质复合物(DNA-蛋白质复合物或RNA-蛋白质复合物)比未结合的探针迁移速度慢,从而检测DNA/RNA序列与蛋白质的相互作用。


结果展示[1,2]

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实验完成周期及交付标准

1. 实验周期:4-7周

2. 交付标准:X光片、实验报告(实验步骤、试剂、仪器)

 

需确认的信息

1. 目的基因与蛋白信息

2. 样本种属及类型

3. 是否提供抗体


参考文献

[1] Miller D E , Patel Z H , Lu X , et al. Screening for Functional Non-coding Genetic Variants Using Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) and DNA-affinity Precipitation Assay (DAPA)[J]. Journal of Visualized Experiments Jove, 2016, 2016(114).

[2] Parés-Matos EI. Electrophoretic Mobility-Shift and Super-Shift Assays for Studies and Characterization of Protein–DNA Complexes[M]// Gene Regulation. Humana Press, 2013.

[3] Bak G , Han K , Kim K , et al. Electrophoretic mobility shift assay of RNA-RNA complexes.[J]. Methods in Molecular Biology, 2015, 1240:153.


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