石蜡/冰冻切片免疫组化

时间:2018-10-30浏览次数:1240

免疫组化

应用免疫学基本原理,通过标记的特异性抗体(或抗原)对组织内抗原(或抗体)的分别进行组织和细胞原位检测,从而进行定位、定性及相对定量的研究。


实验意义

1. 免疫组织化学可应用于恶性肿瘤的病理诊断和科研工作。

2. 可与组织化学染色方法的形态学诊断相结合,提高疑难肿瘤的鉴别诊断的准确率,并为肿瘤进行进一步的病理分型。

3. 指导和提供临床治疗方案的选择。


实验步骤

1. 石蜡切片免疫组化:


①67℃烘箱烘片2小时,常规脱蜡至水,用pH 7.4的PBS冲洗三次,每次3 min;

②将切片置于沸腾的柠檬酸盐缓冲液中中档微波处理10 min,蒸馏水冲洗三次,PBS冲洗三次,每次3 min;

③3%H2O2室温孵育10 min阻断内源性过氧化物酶的活性,PBS冲洗三次,每次3 min;

④5~10%正常山羊血清(PBS稀释)封闭,室温孵育10 min,吸去血清后滴加稀释至适当比例的一抗,37℃孵育1-2 h或者4℃孵育过夜;

⑤PBS冲洗三次,每次3 min;⑤滴加稀释至适当比例的带标记二抗,37℃孵育10~30 min,PBS冲洗三次,每次3 min;

⑥滴加适当比例稀释的辣根酶标记物工作液,37℃孵育10~30 min,PBS冲洗三次,每次3 min;

⑦显色剂显色,自来水充分冲洗,复染细胞核,酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。


2. 冰冻切片免疫组化:


①新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片,厚度为5~6 μm;

②载玻片可不打底,裱片后立刻用电吹风吹干;

③染色前需用冷丙酮4℃固定10~20 min;

④PBS洗2次,每次5 min;

⑤3%H2O2灭活内源性过氧化物酶20 min,需避光处理;

⑥后续血清封闭与抗体孵育步骤与石蜡切片相似,最后脱水透明封片进行观察。


结果展示

1. 石蜡切片免疫组化[1]


免疫组化1.png


2. 冰冻切片免疫组化[2]

免疫组化2.png


实验完成周期及交付标准

1. 实验周期:1-2周

2. 交付标准:蜡块、切片、染色图片、灰度值分析、柱状图、实验报告(实验步骤、试剂、仪器等)


需确认的信息

1. 样本的种属?

2. 样本类型(固定的组织or蜡块or切片)

3. 检测的目的蛋白

4. 是否提供一抗,公司可代购

5. 阳性率或者半定量分析要求

6. 拍照要求


文献参考 

[1] Jensen K , Rikke KrusenstjernaHafstr?m, Lohse J , et al. A novel quantitative immunohistochemistry method for precise protein measurements directly in formalin-fixed, paraffin-embedded specimens: analytical performance measuring HER2[J]. Modern Pathology An Official Journal of the United States & Canadian Academy of Pathology Inc, 2016, 30(2):180.

[2] Shi, ShanRong, Liu, et al. Evaluation of the Value of Frozen Tissue Section Used as "Golden Standard" for Immunohistochemistry[J]. American Journal of Clinical Pathology, 2008, 129(3):358.


分割线.png

汇聚科研工匠·引领医学转化

下一篇:IHC