碱性磷酸酶染色

时间:2021-09-26浏览次数:235

碱性磷酸酶染色实验技术简介:
碱性磷酸酶(AKP)的显示方法最早由Gomeri(1939) 提出,现在这种方法称为Gomeri法。碱性磷酸酶是指磷酸单酯酶Ⅰ,它能在pH8.6~10.0的最适条件下分解磷酸单酯,对于与磷酸相接的醇基没有特 异性,Gomeri法是让该酶在碱性条件下,分解甘油磷酸钠,产生磷酸根。

碱性磷酸酶染色实验技术原理:
在一定条件下,使细胞中的酶作用于酶的底物,使其产物在原地进行 捕捉、沉淀转化为有色产物。细胞组织中的碱性磷酸酶在碱性(PH9.0-9.6)环境下使作用液中的底物(a一磷酸萘酚钠)水解,产生出a萘酚,然后再与 偶氮盐偶联,生成不溶性的耐晒染料(最终产物的颜色因所用偶氮盐的品种不同而有所不同)。

实验操作流程:
1、取材、 固定、包埋、切片;
2、取已粘好烘 干的切片两块,放入二甲苯(一)→二甲苯(二)(各3-4分钟)的染缸中进行脱蜡,再经100%乙醇(一)→100%乙醇(二)→95%乙醇→90%乙醇 →70%乙醇→30%乙醇→水。每级各一分钟,在移切片时,用镊子夹住切片震荡并提起,放下反复几次,在移入下一染缸边缘前稍停留,让溶液滴净后,再入下 一染缸,以免把上一染缸溶液过多带入下一染缸,而影响切片质量;
3、将其中一块切片以蜡笔作一标记(用作对照组切片),放入沸水中煮沸5分钟;
4、将两块切片均放入AKP作用液中孵育30-60分钟,作用液要事先预热到37°C,水浴中进行;
5、取出切片在蒸馏水中洗涤;
6、放入硝.酸.钴溶液2-3分钟;
7、蒸馏水冲洗干净,否则切片易被污染,影响定位;
8、切片浸入硫化铵中2-3分钟;
9、蒸馏水冲洗干净;
10、经各级酒精脱水。即30%乙醇→70%乙醇→90%乙醇→950%乙醇→100%乙醇(二)→100%乙醇(一),各级一分钟。
在显微镜下观察,细胞中有黑色沉淀存在的地方,就表明有酶的存在。煮沸的对照切片无黑色沉淀。

晶莱生物病理类实验服务总览表

类别服务项目备注说明
      制
      片
      前
      处
      理
石蜡包埋包埋1块固定后组织按客户要求取材,脱水,包埋成蜡块(进口石蜡)
特殊包埋(细胞、材料、眼球等)包埋1块包埋要求难度较高(含特殊位置取材)
石蜡组织芯片阵列点位包埋客户提供供体蜡块及标本信息
软化(肝硬化、皮肤结痂、植物等)1块标本软化较为坚硬组织软化处理
骨组织脱钙(小)1块标本脱钙最大面≤2cm²骨组织脱钙
骨组织脱钙(大)1块标本脱钙最大面>2cm²骨组织脱钙
骨组织EDTA脱钙(小)1块标本脱钙最大面≤2cm²骨组织EDTA脱钙
骨组织EDTA脱钙(大)1块标本脱钙最大面>2cm²骨组织EDTA脱钙
石蜡白片石蜡白片1片组织防脱载玻片石蜡白片
冰冻组织制备冰冻包埋及前处理4%多.聚.甲.醛固定的组织或OCT包裹的新鲜组织(-80℃或液氮内保存,干冰运输)
冰冻切片冰冻组织切片1片同一组织连续切片3张以上免制备费
      染
      色
HE染色染色含切片苏木.精-伊红染色法,观察组织形态
油红O染色染色含冰冻切片4%多.聚.甲.醛固定,冰冻切片。对组织内脂质(如脂滴)染色
番红O固绿染色染色含切片常用于植物、软骨组织形态染色
Masson染色染色含切片观察组织纤维化和肌纤维的鉴别及组织纤维化程度
天狼猩红染色染色含切片观察组织纤维化程度,及偏振光进行胶原亚型的分区
PAS糖原染色染色含切片观察肝脏、肌肉等组织内糖原的变化;肠胃肺支气管等杯状细胞酸性粘液物质变化
阿利新蓝染色染色含切片常用于软骨组织或早幼粒细胞、巨核细胞染色
甲苯.胺蓝染色染色含切片观察软骨组织形态或组织内肥大细胞的数量及分布
尼氏染色染色含切片观察脑或脊髓等中枢神经系统内神经元尼氏体的变化
LFB髓鞘染色染色含切片观察神经髓鞘的形态及变化
普鲁士蓝染色染色含切片常用于吞噬细胞内铁粒子的含量和定位
VG染色染色含切片显示组织胶原纤维及肌纤维的形态及变化
EVG染色染色含切片观察血管弹性纤维的形态及变化
VonKossa染色染色含切片观察组织内病理性钙沉积情况
刚果红染色染色含切片一般用于组织淀粉样变染色
维多利亚蓝染色染色含切片用于弹力纤维染色
    免疫
    组化
免疫组化预式染色含切片试两个一抗浓度后拍照
免疫组化正式染色含切片客户提供一抗,常用二抗公司提供
免疫组化芯片染色含切片免疫组化组织芯片染色
免疫荧光(石蜡-单标)染色含切片和拍照需实验前商定拍照倍数及视野
免疫荧光(石蜡-双标)染色含切片和拍照需实验前商定拍照倍数及视野
免疫荧光(冰冻-单标)染色含冰冻切片和拍照需实验前商定拍照倍数及视野
免疫荧光(冰冻-双标)染色含冰冻切片和拍照需实验前商定拍照倍数及视野
抗体代购
详情请咨询工作人员
   TunelTunel(POD自带试剂盒)染色含切片细胞凋亡染色,客户需提供Tunel试剂盒
Tunel(公司提供试剂盒)细胞凋亡染色,公司提供罗氏POD Tunel试剂盒
凋亡试剂盒代购染色含切片详情请咨询工作人员


晶莱病理实验室:上海实验室;北京实验室;提前预约免费上门取样!
更多病理学实验服务内容详情请咨询晶莱生物!

收费标准/服务周期/提供结果:

欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
更多实验技术服务请浏览网站其他内容,或来电咨询!

做实验,找晶莱!您的科研生涯,我们一路相伴!
【平台项目开展范围】慢病毒,腺病毒,RNAi类,分子生物实验,病理实验,免疫学实验,细胞实验,动物实验,蛋白组学实验,芯片类实验,并为广大客户朋友们提供课题设计指导、基金申请指导等服务。


上一篇:HE染色

下一篇:甲苯胺蓝染色实验服务