神经元细胞培养实验服务

时间:2021-09-23浏览次数:207



实验技术简介:

体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。

神经细胞培养的主要优点:
(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后,能保持结构和功能上的某些特点, 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系,这就提 供了体内生长过程在体外重现的机会。
(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化,便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显 微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免疫组化和电生理等手段进行研究。
(3)易于施行物理(如缺血、缺氧)、化学和生物因子(如 神经营养因子)等实验条件, 观察条件变更对神经细胞的直接或间接作用。
(4)便于从细胞和分子水平探讨某些神经疾病的发病机制,药物或各种因素对胚胎或 新生动物神经细胞在生长、发育和分化等各方面的影响。

一、液体配制:硼酸硼砂缓冲液:0.05M四硼化钠45ml,0.2M硼酸55ml,pH8.4;胰酶-EDTA消化液:胰酶-0.125g;EDTA-0.2g;D-Hanks平衡盐液定容至100ml。所用的培养板、培养瓶或玻片预先经100μg/L多聚赖氨酸硼酸盐缓冲液于37℃包被4h,三蒸水洗三遍晾干备用。

二、操作步骤如下:
1、出生2 d SD大鼠麻醉后,碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤,依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜,无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks平衡盐液中。
2、在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层,除去脑膜,剪碎组织成约1mm3大小,加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱内消化20min,中间摇晃一次。
3、随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液(DMEM+10%FBS)的离心管内终止消化液作用5min。
4、用滴管吸出组织转移到装有预冷的DMEM+10%FBS的离心管内,用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次,静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤2~3次。
5、将所收集的上清经200目筛网过滤。
6、过滤后的细胞悬液于800r/min离心5min,弃上清,管内加入新鲜培养液(DMEM+20%FBS)并吹打成单细胞悬液。
7、细胞计数,调整细胞密度按1.5×105/cm2种入6孔板内,放入CO2孵箱中培养。培养48h后换液并加入Ara-C使其终浓度为1×10-5mM/L。Ara-C作用24h后全量换液。以后每隔3天半量换液一次。

三、无菌操作的注意事项:
    细胞原代培养一定要保持工作区的无菌清洁,先用紫外灯杀菌1h,操作前用75%乙醇消毒,穿上实验服,戴上口罩和帽子,操作时不能大声说话,双手戴上一次性橡胶手套,整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。

四、服务流程:
1、 讨论分析实验方案
2、 确定服务内容
3、 签订服务合同
4、 进行实验,定期向客户反馈
5、 整理实验报告
6、 完成合同内容
7、 后续实验服务,进一步合作

五、细胞服务项目:


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