肝硬化动物模型

造模机制
给予动物具有肝毒性的化学物质，致使机体发生慢性肝脏损害，最终导致肝硬化。目前应用较多的有四.氯.化.碳carbon tetrachloride, CCl4)、硫代乙酞胺(thioacetamide,TAA)、二甲基ya硝胺(nitrosodimethylamine,DMN)。

CCl4是诱导实验动物产生肝纤维化和肝硬化最广泛使用的化学性肝毒物。CCl4经肝微粒体内依赖于细胞色素P450的氧化酶CYP2E1激活后。产生自由基CCl3及Cl，它们与肝细胞内大分子发生共价结合，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，从而导致贮脂细胞活化，释放出Ⅳ型胶原酶，降解Ⅳ型胶原。同时该细胞由合成分泌Ⅲ型胶原改为合成分泌Ⅰ型胶原，取代了Ⅳ型胶原，促使肝脏纤维化。TAA会延长肝细胞有丝分裂过程，并阻碍RNA从胞核到胞质的转移，影响依赖酶的代谢过程，导致肝细胞坏死，引起间质内结缔组织的生成增多。DMN经肝微粒体代谢为甲醛和甲烷ya硝胺，使核酸、蛋白质发生甲基化反应，随后导致肝细胞坏死或凋亡，细胞外基质进行性增加。

实验方法
单纯CCl4诱导模型一般采用30％～50％CCl4油溶液，给药途径有口服、腹腔注射及皮下注射，时间依给药途径和剂量不同，8周～4个月不等。所用动物包括大鼠、小鼠、家兔、犬、猴等。

大鼠：可用60％CCl4橄榄油溶液以3ml/kg给雌性Sprague Dawley大鼠皮下注射，每周2次，共12周；或用液状石蜡配制15％CCL溶液，按0.75ml/ kg腹腔注射，每周3次，共6周；用橄榄油将CCl4配成40％的溶液，首次按体重5ml/kg皮下注射，以后以3ml/kg注射，3天一次，共42天；30％CCl4溶液20ml/kg，每周2次，共7周。

小鼠：40％CCl4橄榄油4ml，一次性口服可诱发小鼠肝小叶中央坏死，CCl4油剂皮下注射1～3ml/kg，每周2次，肝硬化可在12～15周形成。

家兔：模型用CCl4 12ml/kg一次性口服，可诱发兔肝小叶中央坏死，用CCl4 10ml/kg一次性口服，可诱发兔急性中毒性肝坏死。

犬：模型用CCl4溶液按12ml/kg，配以等量花生油，清晨空腹经腹腔注射，每周注射2次，共注药8周，形成肝硬化。

猫：模型用3ml/kg CCl4皮下注射，可诱发猫肝小叶中央坏死、脂肪肝。

复合CCl4诱导肝硬化模型：CCl4+乙醇+高脂肪饮食诱导肝硬化是目前较为常用的方法，大鼠皮下注射40％CCl4(花生油以4：6配成，第1次用5ml/kg，以后每隔3天注射3ml/kg)，采用高脂低蛋白食物(以玉米面为饲料，加0.5％胆固醇，实验第1周、2周加20％猪油)，30％乙醇为唯一饮料，第6周末即可形成肝硬化。肝硬化形成后饲料中加入2％的氯化钠可制作肝硬化腹水模型。CCl4油溶液+乙醇灌胃+胆固醇低胆碱饲料：大鼠皮下注射40％～50％CCl4油溶液(3ml/kg)，每周2次。第2周开始，20％～30％乙醇隔1ml灌胃，并给予混有0.5％胆固醇低胆碱饲料喂养，连续8周，大鼠肝脏正常结构破坏，形成厚的纤维间隔，并分割形成假小叶。

TAA诱导模型：用生理盐水配成30％的TAA溶液，作为大鼠的饮用水，连续饮用8周可产生纤维化，17周产生肝硬化。亦可对小鼠进行腹腔注射。 

DMN诱导模型：大鼠按10mg/kg剂量，生理盐水稀释的1％DMN溶液腹腔注射，每周3次。

模型特点
CCl4进入肝脏后引起肝小叶内中央肝静脉周围细胞坏死，引起纤维增生，而纤维增生以小叶内窦间隙为主，实验早期即可见明显的肝细胞损伤和炎症反应，CCl4复合造模法分期明确，第1周、2周以肝细胞变性坏死为主，3周、4周以弥漫性纤维增生为其特征，第5周、6周，纤维间隔、结节与假小叶形成。TAA溶液饮用诱导8周时会产生纤维化，17周时产生肝硬化，且各个体产生纤维化的程度相当。DMN诱导造模周期短，第21天可见胶原纤维沉积，胆管增生，大鼠死亡率低。

需确认的信息
1. 模型种属（大鼠还是小鼠或是其他种属）
2. 动物体重有无要求，年龄有无要求
3. 雌雄有无要求
4. 模型构建具体方案
5. 取材要求（采血、取组织样本）