双荧光素酶报告基因检测

实验意义

1.可广泛引用与miRNA的靶基因检测，可以判断miRNA是否与靶基因结合，也可以定量反映miRNA对目的基因的抑制作用。

2.转录因子（反式作用因子）存在DNA结合域，可以与靶标启动子中的特异序列（顺式作用元件）进行共价结合，从而调控基因的表达，双荧光素酶报告系统是检测这类转录因子与基因特异序列的重要手段，是真核基因表达调控研究的常用方法。

实验原理及流程

双荧光素酶是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶，萤火虫荧光素酶呈黄绿色，波长550-570nm，海肾荧光素酶呈蓝色，波长为480nm。报告基因实验是将靶标启动子的特定片段插入荧光素酶表达序列的前方，构建带有靶标启动子片段的双报道基因质粒，然后将待测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染HEK293细胞或者其他相关细胞系，如果转录因子能够激活启动子，则报告基因表达，荧光素酶的表达量与转录因子作用强度成正比。加入荧光素酶底物即可根据荧光强度检测转录因子与靶启动子之间是否存在相互作用。荧光素酶报告基因可构建在同一质粒或者构建为两个质粒，即转录因子质粒与靶启动子片段质粒。

结果展示[1]

实验完成周期及交付标准

实验周期：4-6周

交付标准：双荧光素酶报告基因检测、鉴定结果报告、分析报告、实验报告（试剂、耗材、实验步骤）、原始数据等

需确认的信息

1. 基因与启动子信息

2. 具体分组信息

3. 是否提供质粒？

参考文献

[1] Miraglia E , Nylén, Frank, Johansson K , et al. Entinostat up-regulates the CAMP gene encoding LL-37 via activation of STAT3 and HIF-1α transcription factors[J]. Scientific Reports, 2016, 6:33274.

[2] Azimzadeh P , Olson J A , Balenga N . Reporter gene assays for investigating GPCR signaling.[J]. Methods Cell Biol, 2017:89-99.

汇聚科研工匠·引领医学转化