3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞

冻存细胞接收后的处理：

1.干冰运输，收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏；
2.收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

复苏细胞接收后的处理：

1.收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。
4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
   ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
   ②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
   ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
   ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
   ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
   ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
   ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
   ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
   ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
   ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
   ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
   ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。