人食管癌细胞-ECA109

细胞接受后的处理：
    1. 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
    2. 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
    3. 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的完全培养基。
    4. 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
    5. 接到细胞次日，请检查细胞是否污染。

细胞培养步骤
    培养基及培养冻存条件准备：
    1. 准备RPMI-1640培养基；北美胎牛血清，10%；双抗1%。
    2. 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
    3. 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

细胞处理：

     1. 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
    2. 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
    1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
    2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
    3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
    4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存：

    待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。