人肺胰癌细胞系-A549

A549细胞的传代：

    (1)无菌操作打开培养瓶瓶盖，倒掉培养液。
    (2)向已经长满的细胞中加入消化液1ml轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍细胞表面，吸弃或倒掉，轻轻冲洗细胞表面2~3遍，以尽可能去除原培养液中的牛血清。
    (3)加入1 ml消化液，在37°C培养箱中孵育5~8 min后把培养瓶放置在倒置显微镜下观察，发现细胞的胞质回缩、胞间质增大后，立即终止消化。
    (4)加入5 ml预热至37°C的培养液，用玻璃吸管反复吹打以分散细胞。吹打过程按顺序进行，从培养瓶底部-边开始到另一边结束，以确保所有的底部都被吹到。

    (5)吸取一半的细胞悬液，接种到新的培养瓶中，补足培养液，并且添加10%-20%的胎牛血清。通常每瓶液体量为5-10ml。
    (6)倒置显微镜下观察，37C、5%CO2培养。

注意事项:
    (1)所有液体在加入细胞瓶前均应预热到37C。所有液体均应调整pH至7.2左右，均不能超过7.4。
    (2)细胞消化传代时吹打不要产生气泡，吹打力量不宜过多，否则会损伤细胞。
    (3)严格执行无菌操作的要求。
    (4)尽可能减少消化液剩余量，过多时会对细胞产生损伤，可多添加些含牛血清的培养液中和。
    (5)培养瓶在室温中放置时间应尽可能短。