脂肪肝动物模型全指南：4 类模型、3 套 Protocol 与 5 层评价指标！

脂肪肝动物模型覆盖的病理阶段并不相同，HFD以肥胖、胰岛素抵抗和肝脂肪变为主；Western/GAN类饮食可进一步形成MASH样炎症和纤维化；CDAHFD则以造模周期较短、肝损伤和胶原沉积较明显为特点。

本文整理常用模型类型、3种代表性Protocol及评价指标，重点对应早期脂肪变、MASH和纤维化不同研究阶段。

图1丨MASLD 疾病进展谱与模型覆盖示意图

目前常见模型大致分为饮食诱导、营养缺陷、遗传和复合模型。

饮食诱导模型保留肥胖、胰岛素抵抗等代谢背景，疾病进展相对缓慢。营养缺陷模型能较快形成肝炎症和纤维化，但外周代谢表型与肥胖相关MASLD存在差异。遗传模型突出特定代谢异常，复合模型则通过增加额外刺激缩短疾病进展时间。

图2丨HFD与Western diet诱导的肝脏病理改变

1. HFD：肥胖和早期肝脂肪变

实验动物： 常用C57BL/6J小鼠，6–8周龄开始饮食干预。

建模流程：

（2） 模型组给予高脂饮食，常见配方脂肪供能约60 kcal%，对照组使用配方匹配的低脂饲料；

（3） 持续饲喂12–16周，可形成明显肥胖和肝脂肪变；延长至20–24周后，部分模型可出现更明显的肝损伤和炎症；

（4） 定期记录体重和摄食情况，代谢研究可增加GTT和ITT；

（5） 终点采集血清和肝组织，用于生化、脂质定量和组织学检测。

主要表型： 体重和脂肪量增加、胰岛素抵抗、肝TG升高、肝细胞脂肪变。单纯HFD在常用周期内形成的炎症和纤维化通常较轻。

常用评价：  体重、GTT/ITT、血脂、肝TG、HE、Oil Red O、ALT/AST。

图3丨Western diet诱导MASH样肝脏病理进展

2. Western/GAN类饮食：MASH进展模型

Western/GAN类饮食在高脂基础上增加糖和胆固醇刺激，更容易形成脂肪变、炎症和纤维化。

实验动物： 常采用C57BL/6系小鼠。

建模流程：

（1）适应性饲养后开始饮食干预；

（2） Western类配方常含约40%–45%脂肪供能，同时增加蔗糖/果糖和胆固醇，部分体系联合高糖饮水；

（3） 饲喂16–24周后可出现较明显脂肪变和小叶炎症，延长周期后纤维化逐渐增加；

（4） 终点同时检测代谢状态、肝损伤、炎症和胶原沉积。

主要表型： 肥胖、胰岛素抵抗、肝脂肪变、小叶炎症及不同程度的纤维化，更适合观察MASLD向MASH进展的过程。

常用评价： HE、肝TG、ALT/AST、炎症指标、Sirius Red/Masson、α-SMA、COL1A1。

Western/GAN并不是完全统一的配方名称，脂肪来源、糖比例和胆固醇含量都会影响成模速度和纤维化程度，具体饲料配方需要作为模型参数记录。

图4丨Western diet诱导MASH样肝脏病理进展

3. CDAHFD：短周期MASH纤维化模型

CDAHFD即胆碱缺乏、L-氨基酸限定高脂饮食，可在较短时间内形成脂肪变、炎症和纤维化。

实验动物： 常采用C57BL/6J小鼠。

建模流程：

（1） 适应性饲养后随机分组；

（2） 模型组给予CDAHFD，对照组使用相应对照饲料；

（3） 约3周可出现明显肝脂肪变和炎症，6周左右可观察到胶原沉积，8–12周纤维化进一步发展；

（4） 造模期间记录体重和一般状态；

（5） 终点重点进行肝损伤、炎症和纤维化评价。

主要表型： 快速脂肪变、小叶炎症和纤维化。明显肥胖和胰岛素抵抗并不是该模型的主要特征。

常用评价： ALT/AST、HE、Sirius Red/Masson、α-SMA、COL1A1、羟脯氨酸。

图5丨CDAHFD诱导小鼠肝脂肪变、炎症及进行性纤维化

1. 基础表型与代谢指标：看整体代谢状态

·体重、肝重、肝指数： 观察肥胖程度及肝脏增重；

·TG、TC、LDL-C、HDL-C： 评价外周脂质代谢；

·空腹血糖、GTT、ITT： 评价糖代谢和胰岛素敏感性；

·肝组织TG： 定量肝内脂质蓄积。

2. 组织病理：看脂肪变和MASH病理程度

·HE： 观察脂肪变、小叶炎症和肝细胞气球样变；

·Oil Red O： 显示冰冻切片中的中性脂质和脂滴，可进行面积定量；

·Sirius Red/Masson： 显示胶原沉积及纤维化分布；

·IHC/IF： 可检测α-SMA、F4/80等，观察肝星状细胞活化和炎症细胞浸润。

脂肪变、小叶炎症和气球样变共同构成MASH组织学评价的重要内容。

3. 炎症与肝损伤：看炎症性损伤程度

·ALT、AST： 反映肝细胞损伤；

·TNF-α、IL-1β、IL-6、CCL2： 评价炎症反应；

·F4/80、CD11b： 观察髓系炎症细胞浸润；

·MDA、GSH/GSSG、SOD： 评价氧化应激。

4. 纤维化指标：看胶原沉积和HSC活化

·Sirius Red/Masson： 观察胶原分布及面积；

·羟脯氨酸： 定量肝组织总胶原；

·α-SMA： 反映肝星状细胞活化；

·COL1A1、COL3A1、TGF-β1： 评价ECM形成和纤维化相关变化。

5. 机制指标：看疾病进展涉及哪些通路

根据研究方向增加相应检测，例如：

·脂质合成： SREBP-1c、ACC、FASN；

·脂肪酸氧化： PPARα、CPT1A；

·炎症信号： NF-κB及相关炎症通路；

·细胞死亡： Cleaved Caspase-3、GPX4、ACSL4等；

·肠—肝轴： 肠屏障、菌群及内毒素相关指标。

1. 饮食配方

脂肪来源、脂肪供能比例、糖组成及胆固醇含量均会影响脂肪变、炎症和纤维化进展。

2. 造模周期

同一种饮食在不同时间点可对应不同病理阶段，早期以脂肪变为主，延长刺激后逐渐出现炎症或纤维化。

3. 品系和性别

不同遗传背景及性别对高脂饮食和胆固醇刺激的敏感性存在差异。

4. 组织处理

固定肝组织取材部位及病理流程可降低组内差异。Oil Red O使用冰冻切片；HE、Masson、Sirius Red及多数IHC采用固定组织切片。

HFD、Western/GAN类饮食和CDAHFD分别覆盖了脂肪肝研究中的不同代谢和病理特征。HFD突出肥胖、胰岛素抵抗和肝脂肪沉积；Western/GAN类模型可进一步观察MASH和纤维化进展；CDAHFD则具有炎症和胶原沉积形成较快的特点。

评价体系对应不同层级：基础代谢反映整体状态，组织学显示脂肪变和MASH病理，炎症指标反映肝损伤，纤维化检测用于评价胶原沉积，机制指标进一步分析疾病进展相关通路。