【五分钟讲实验】肝纤维化动物模型干货分享

1. 病因

进行性肝纤维化是由于感染性（乙肝病毒、丙肝病毒）、药物毒性（酒精诱导）、代谢性（非酒精脂肪肝继发）、胆汁淤积或自身免疫损伤引起的长期肝损伤疾病。最终，肝纤维化可能导致临床上明显的肝硬化和肝功能衰竭。

2. 发病机制

（图片来源于网络）

不同造模方法比较

1. 实验材料

① 动物：6-8周龄BALB /c小鼠，雄性（BALB /c对四氯化碳药物敏感性更高，雌性易对四氯化碳耐受，多选用雄性）。

② 试剂：CCl4（危化品）、橄榄油（试剂级）。

③ 耗材：一次性注射器、EP管。

2. 实验步骤

① 四氯化碳：橄榄油以 1：4 体积混合，给小鼠称重，按照3μL/g剂量计算小鼠需要注射的药剂体积（若药剂推不出来，可将比例调整为1：10-20，调整注射量）。

 ② 注射器吸取对应体积药剂，左手固定小鼠，右手持注射器，使小鼠的头部朝下，腹部向上，防止注射时损伤大肠、小肠等脏器。

③ 将事先吸取好液体的注射器针尖平面朝上，针朝头方向平行扎入皮内，针头到达皮下后，沿皮下向前推进3-5mm，然后使针头与皮肤呈45°角刺入腹膜。针头刺入腹膜后有落空感，此时在保持针头不动的状态下回抽针栓，若回抽无血或尿液，则可以注射。

④ 缓慢拔出针头，并轻微旋转针头，防止漏液。

⑤ 注射完成后，观察并记录小鼠一般状态；6.每周注射两次，6周后取肝脏组织行病理检测，采集血液分离血清肝功能生化检测确定成模情况。

3. 评价指标

① HE染色检测肝脏病理改变； 

② Masson染色检测肝脏胶原纤维沉积情况；

③ 肝功能血生化检测。

4. 模型特点

4-6周左右开始出现轻度肝纤维化，ALT、AST升高，7-8周左右大量肝细胞变性，纤维包裹形成假小叶，随着给药时间延长，纤维化程度加重，10周左右开始发展为肝硬化。

5. 注意事项

① 造模试剂需保存得当，提前分装密封保存，现配现用，避免药物失效； 

② 四氯化碳需与溶剂混匀，选择合适比例，腹腔给药最佳体积5 mL-10 mL/kg，适当降低注射总体积。

6. 风险评估

① 有个体差异，模型进程不好控制，需定期取材行病理检测验证模型进程，多预留动物； 

② 前期死亡率不高，给药时间延长，动物可能会精神萎靡，食欲不振，有一定死亡率。