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【五分钟讲实验】实验动物血样检测老不准,多半是因为这个!

时间:2023-11-20 阅读:540

采血是动物实验中最常用的操作技术之一。在实验过程中发现,大鼠血液生化结果受到诸多因素的影响。按照时间顺序主要分为2个阶段:

1.采样准备过程:就是血样检测前的过程,包括准备实验大鼠、血样采集处理;

2.采样分析过程:就是检测血样的过程,包括分析仪器、试剂等。




采样准备过程


1. 固定因素

实验大鼠品系、微生物级别、性别、年龄是影响大鼠血液生化指标检测结果的固定因素。

因此,根据选用大鼠品系、级别、性别、年龄建立适合的参考区间来解决固定因素的影响。



2. 饲养

饲养是可变因素中的外源性因素,饮食也是影响血液生化指标的重要因素高碳水化合物食物可使血糖升高;高蛋白或高核酸食物引起尿素及尿酸的升高;高脂肪食物引起甘油三酯(TG)升高

动物实验室的饲养环境不同,喂养的饲料也会使大鼠血液生化指标发生明显改变,在展开课题研究时根据实验设计选择合适的饲料进行正确饲养,避免因饲料喂养干扰实验结果。



3. 采血前禁食时间

空腹一般是指进食后12h空腹时间过长,饥饿时间就过久,可使血糖、蛋白质降低,胆红素升高在进行动物实验过程中对实验大鼠禁食时间各实验室并不统一,使用较多的禁食时间有12h、14h、16h、19h、24h。

若餐后采集血液标本,血清常出现乳糜状,而乳糜状血清对光线有一定的散射作用,对样本空白吸光度值产生干扰;被分析物的分布非均一性,导致测定过程中的随机误差加大。使TG、葡萄糖升高,影响检测结果的正确性。

规范空腹采集血样标准,当有特殊情况为保证实验动物体重而不能采取禁食采血时要注意,未禁食采集血样条件保持一致,避免检测结果的差异。



4. 饲养环境

相关研究表明血液生化指标检测结果经统计学分析证明普通级与SPF级大鼠血液生化指标差异显著,多数生化指标雌雄之间存在显著差异。

相关研究表明普通级大鼠的ALT、ALP、TP、BUN、TBIL、CRE均高于SPF级大鼠(P<0∙01);SPF级大鼠的CHO、CK、AST、ALB、GLU均高于普通级大鼠(P<0∙01)。

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5. 血样采集

血清最好使用带分离胶真空采血管,这样离心后血清和血细胞被分离胶隔开,可以保证血清的检测质量。

若是检测需要血浆,根据检测项目提前选择好抗凝剂:

EDTA-血常规

枸橼酸钠—凝血功能、血栓弹力图、血小板功能检测(抗凝剂与血比例为1:9)

草酸钾/氟化钠---抑糖分解,血糖测试

枸橼酸钠---血沉淀、血流变检测(抗凝剂与血比例为1:4)

肝素钠---血浆生化,血气分析

分离胶---血清生化检测

普通---血清分离(促凝和自然凝血)

正确选择抗凝剂,避免因错误使用抗凝剂导致问题结果的发生。同时建议在动物实验前后进行比较时应统一血清或是血浆。



6. 麻醉剂选择

常用于麻醉的有氨基甲酸乙酯(乌拉坦)、水合氯醛、乙醚、戊巴比妥钠、二氧化碳窒息麻醉

有相关文献报道无麻醉断头与戊巴比妥钠麻醉采血结果差异较大,实验过程中选择合适的麻醉剂量,并控制麻醉时间进行采血,避免麻醉影响大鼠血液生化指标。



7. 采血部位

采血部位的差异一方面与体位有关,另一方面是动脉、静脉、动静脉混合血的差异。

(1)用血量较少的检验如红、白细胞计数,血红蛋白的测定,血液涂片以及酶活性微量分析法等,可刺破组织取毛细血管的血。

(2)当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时若需反复多次,应自远离心脏端开始,以免发生栓塞而影响整条静脉。

(3)如研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱,需要比较动、静脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH以及K+、Na+、Cl-离子浓度,必须采取动脉血液。

如果没有特殊要求,大鼠的终末采血都推荐安乐死或者深度麻醉后心脏采血,这种方式采血比较多,而且不容易污染。

对于大鼠非终点采血,无论单次采血还是多次采血都比较推荐使用注射器进行颈静脉采血,随抓随采。如果不从尾静脉给药的话,尾静脉采血也是非常推荐的方式。

若实验过程需要多次采血,采血部位要统一。





采样分析过程


1. 血清质量

接收到大鼠血样后,查看血清质量并进行标注后开始检测。若不能及时检测,分离血清、密封放冰箱里保存。

在室温且开放式保存可使血样蒸发,导致检测结果的升高。(保存不当容易发生溶血,红细胞中一些成分释放进入血清或者血浆,使ALT、AST、乳酸脱氢酶、钾、总胆红素、肌酐、总蛋白检测结果含量增加;红细胞的破裂导致检测血样出现特有的红色,从而干扰吸光度值检测,使检测结果失去真实性和正确性。)



2. 试剂盒

生化检测使用的试剂盒有方法学和生产厂家的差异 ,酶浓度、底物的种类和浓度、缓冲液的种类、离子强度和pH、温度、激活剂与抑制剂配方的差异,造成试剂盒的性能指标如稳定性、准确度、精密度、抗干扰性、线性范围、灵敏度等也有所不同。

建议实验中使用固定的试剂盒,选择能够溯源到参考方法或推荐方法的校准品。



3. 仪器设备

使用性能符合要求或经检定合格的分光光度计、半自动或全自动生物化学分析仪。全自动生化分析仪检测速度快、精密度高,使用双波长,能够减少杂散光影响及减少样本本身光吸收的干扰,建议实验前后数据比对用相同检测仪器设备。

晶莱生物全自动动物生化检测系统

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吸管、真空采血管、样品杯等玻璃耗材可以选用一次性耗材,反复使用的耗材一定正确清洗,并注意实验室用水,清洁程度直接影响实验结果的准确性。


综上所述,实验大鼠准备、血样采集、分析仪器、试剂等诸多影响因素,都会影响大鼠血液生化检测。

通过以上列举的各项影响因素,在实验找到直接影响检测结果的因 素,采取积极有效的应对措施,采取积极有效的应对措施,确保大鼠血液生化指标检测结果的准确。



参考文献:

1.李红,丁晓静,施嘉琛.大鼠不同部位采集血液标本生化检测的质量控制.毒理学杂志1002-3127(2013)06-0457-02

2.Influencing factors of blood biochemical detection in rats LI Hong* ,ZHANG Wei,JING Haiming,YU Ruyang,GAO Wenhui,ZHAO Liwen,LIN Changying * Central Laboratory,Beijing Center for Disease Control and Prevention,Beijing Key Laboratory of Diagnostic and Traceability Technologies for Food Poisoning /Beijing Research Center for Preventive Medicine,Beijing100013 ,China

3.Detection of the Blood Biochemistry of Conventional and SPF Wistar Rats in Liaoning Area BAO Yu-long LI Jian DU Jia-lin QI Yue LI Xian-hua ZHANG Hong XIANG Shao-jie JIA Dong (Liaoning Institute of Traditional Chinese Medicine Shenyang110034 China).




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