【5分钟讲透实验】如何把控HE染色过程中的种种问题

HE染色（Hematoxylin and Eosin staining）是最常见的组织切片染色技术之一，用于在显微镜下观察和分析组织或细胞的结构和形态。

1.组织固定

组织样本必须被充分固定，以防止处理过程中组织细胞的破坏。用10％缓冲福尔马林（Formalin）进行固定通常是一个比较好的选择。

2.切片制备

对于组织样本的切片厚度和形状需谨慎考虑。切片应该是均匀的，并且不能太薄或太厚。一般来说，4-5微米是一个常见的厚度。

3.pH值调节

染色时调节pH值很重要。组织切片在染色前必须在适当的缓冲液中浸泡，在染色期间pH值应始终稳定.如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

4.控制分色时间

切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。

5.彻底脱去酒精

组织切片需要通过一系列的酒精浓度逐渐脱水，并用透明剂如苯酚、二甲苯等进行透明化。透明化后切片会变得更加清晰，便于染色。

切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。

6.保持切片的湿润

在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。

7.保持切片的湿润

切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。

8.封片注意事项

最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。

9.洗涤

洗涤步骤很重要。未充分清洗会导致染色剂残留，影响结果的质量。每个处理步骤后，应该用足够的缓冲盐水彻底洗涤。

10.避免空气暴露

空气中的灰尘和污染物会对实验产生不利影响，因此在染色过程中，需要避免将切片长时间暴露在空气中，并保持实验室的清洁和卫生。

11.监控染色反应

染色的过程应该密切监测，以便在必要时进行微调。需要管理好每个步骤的时间和温度，以避免过度染色或染色不足的情况发生。

进行HE染色实验时，需要密切监测染色过程，及时发现并处理任何可能引起问题的问题。如果出现染色异常，应该检查实验条件和实验步骤，并采取相应的纠正措施，以确保染色结果的质量和可靠性。

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