国自然热点circRNA研究之 “环状RNAcircSATB2促进非小细胞肺癌的发展”
时间：2022-10-17 阅读：735Circular RNA circSATB2 promotes progression of non-small cell lung cancer cells
环状RNAcircSATB2促进非小细胞肺癌的发展
研究背景
肺癌（Lung cancer，LC）目前的发病、死亡率居世界癌症中的第一位，是我国人群中常见的恶性肿瘤；非小细胞肺癌（non-small cell Lung cancer,NSCLC）是肺癌的主要类型，主要特点是患者5年生存率低、预后偏差。因此，迫切需要进一步加深对肺癌的认识，并确定早期诊断生物标志物和新的治疗靶点。
环状RNA（circular RNAs，circRNAs）是一类在转录过程中发生首尾相连而形成的环形RNA分子，多数成员来源于基因的外显子区，同时也有来源于内含子区、基因间非编码区或外显子合并内含子的少数成员。目前研究发现，circRNAs在正常机体和疾病发生中均发挥重要功能，其在肿瘤进展过程中的生理和病理作用已引起人们的极大关注。
外泌体（exosome）是一类由细胞释放的、具有脂质双层膜性结构的细胞外囊泡，能够携带蛋白质、核酸、脂质和糖等生物活性分子，并在细胞间起着重要的信息传递作用。circRNAs在外泌体中与线性RNA的比例是细胞中的6倍，其可通过外泌体在供体细胞和受体细胞之间作为信使来介导多种信号通路，外泌体circRNA有可能作为癌症早期诊断与筛查的指标。
研究科学问题
探讨circSATB2在非小细胞肺癌中的功能及其机制研究，寻找有效的肺癌临床检测生物标志物。
研究内容
1、数据库中筛选靶基因，细胞中验证表达
2、circSATB2在非小细胞癌细胞系中功能研究（增殖、迁移、侵袭）
3、circSATB2发挥作用的分子机制研究
4、临床样本中验证ceRNA相关分子的表达
5、circSATB2通过外泌体参与细胞传递研究
6、临床样本中验证circSATB2作为非小细胞肺癌血清标志物
文章框架&技术路线
研究结果及分析
1. 高表达的环状结构蛋白促进非循环链氨基酸细胞的增殖、迁移和侵袭
循环卫星蛋白促进非甾体细胞的增殖、迁移和侵袭。在正常癌细胞和肺癌细胞中的环状SATB2表达。
b 循环卫星B2的基因组定位和剪接模式。
c 环交叉口径氮化产物的鉴定。
d 通过荧光显微镜观察细胞中的GFP标记的慢病毒。
e qPCR检测到的稳定转染环状SATB2敲低和过表达H460细胞的效率。
f EdU测定用于检测环状SATB2敲低和过表达的稳定转染H460和A549细胞的增殖。
g， h 教育U测定的定量分析。
i伤口愈合测定，用于检测circSATB敲低和过表达稳定转染的H460和A549细胞的迁移。
j 跨井迁移测定检测 circSATB 敲低和过表达稳定转染的 H460 和 A549 细胞的迁移。
k 伤口愈合测定的定量分析。
l 跨井迁移测定的定量分析。
m跨井浸润试验，用于检测circSATB2敲低和过表达的转染H460和A549细胞的侵袭。
n，o 跨井入侵测定的定量分析。
结果表明，circSATB2在H460，A549和H1299细胞中高度表达，并显着影响了它们的增殖，迁移和侵袭。
2. 循环卫星蛋白2直接结合miR-326并调节非小细胞中miR-326的表达
循环卫星图2直接与miR-326结合并调节非核糖核细胞中miR-326的表达。
a 用于环卫星B2亚细胞定位的鱼。
b 通过qPCR检测的细胞质和核环状SATB2表达。
c 通过qPCR检测的BEAS-2B和非小细胞液晶细胞中的miRNA表达。
d 环状卫星蛋白2与甲基RNA种子序列之间的序列比对。
e-g 双荧光素酶报告基因测定，用于检测环十二磷酸腺苷酸和miRNA之间的相互作用。
h miR-326在通过qPCR检测的环状结构铁蛋白2-sh和环状交叉蛋白2-OE稳定转染的肺癌细胞中表达。
结果表明，circSATB2主要位于细胞质中，并通过直接与miR-326结合并负调节miR-326表达而在转录后水平起作用。
3. 循环卫星 B2 通过 miR-326 调节 FSCN1 表达
循环卫星2通过 miR-326 调节 FSCN1 表达。
a–c FSCN1 和 GAB1 mRNA 在通过 qRT-PCR 检测到的环十二碳二敲低和过表达稳定转染的肺癌细胞中的表达。
d–f FSCN1 和 GAB1 mRNA 在通过 qRT-PCR 检测到的 miR-326-敲低和过表达肺癌细胞中的表达。
g 表明miR-326过表达可以挽救由环状SATB2诱导的FSCN1 mRNA水平升高。
h 表明miR-326可直接与FSCN1 mRNA结合。
i和j FSCN1和循环卫星蛋白2的表达在非小细胞液晶细胞中呈正相关。
FSCN1蛋白表达受到环相反应B2的正调控，受到miR-326的负调控。
FSCN1被选为miR-326靶点进行进一步研究。
4. 环氧乙烷二、二氧化二十二六和全氟辛烷磺酸组织中的表达
结果表明，循环SATB2、miR-326和FSCN1在非细胞肺癌组织和转移性非小细胞肺癌组织中存在差异表达，并且循环SATB2、miR-326和FSCN1的表达与肺癌淋巴转移有关。循环卫星蛋白2、miR-326和FSCN1表达之间的相关性也支持了它们在非小细胞肺癌转移中的潜在作用以及环氏SATB2、miR-326和FSCN1之间的相互作用。
5. 循环卫星B2通过外泌体参与细胞间通讯
结果表明，与高度表达的环状体共培养的环氏SATB2细胞的环状酶AATB2的环状酶链酶-2B、H460和A549细胞的表达增加。
结果表明，含有circSATB2的外泌体可以被BEAS-2B、H460和A549细胞吸收，参与细胞间通讯，进一步影响NSCLC细胞的进展和正常支气管上皮细胞的增殖。
6. 外泌体循环SATB2可作为非小细胞肺癌的潜在血清生物标志物
非小细胞肺癌患者血清中的外泌体环状SATB2表达。
结果表明，外泌体circSATB2具有作为肺癌和肺癌转移诊断的血液检测指标的潜力，具有高灵敏度和特异性。
文献涉及的实验技术
文献结论
环状RNA circSATB2可以通过直接结合 miR-326 进而调节FSCN1的表达，促进亲非小细胞肺癌的进展，并可能通过外泌体参与细胞对细胞之间的交流。
外泌体 circSATB2 可能成为临床检测NSCLC和转移性非小细胞肺癌的潜在生物标志物。
文献总结
优点：
文章从circRNA-miRNA-mRNA完善的研究了circSATB2在非小细胞肺癌及肺癌转移中的过程。
缺点：
本文大部分是细胞实验，而动物水平的研究比较少
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