iTRAQ&TMT

同位素标记定量

iTRAQ（isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）&TMT（Tandem Mass Tags）分别由AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术，利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或者赖氨酸侧链基团，不同分子量的试剂对不同来源的样品进行标记从而实现不同样品间蛋白质组的比较。

iTRAQ实验步骤

1. 样品准备：将待测样品进行定量计算出样品蛋白浓度；

2. 蛋白还原烷基化及酶解：每组样品各取100μg按照iTRAQ试剂盒要求进行处理，使用测序级胰蛋白酶溶液酶解后，超滤管离心收集酶解肽段；

3. iTRAQ标记：将iTRAQ试剂平衡到室温，用150μL异丙醇溶解，取酶解肽段加入iTRAQ试剂后室温反应2 h，加入水终止反应，等量混合不同组样品，真空冷冻干燥样品；

4. LC-MS-MS分析：使用Thermo的Q-Exactive Orbitrap进行串联质谱鉴定。

5. 数据处理及生信分析

结果展示

全局分析聚类热图

TOP10 的蛋白数目统计分析

实验周期及交付标准

1. 实验周期：4-6周

2. 交付标准：蛋白定量结果、鉴定结果、质谱原始数据、生信分析结果（GO分析、KEGG分析等等）

需确认的信息

1. 样本的种属

2. 样本的类型（组织or细胞or血液）

3. 样本的数量及分组

4. 分析要求

参考文献

[1] Xu X , Zhu Q , Zhang R , et al. ITRAQ-Based Proteomics Analysis of Acute Lung Injury Induced by Oleic Acid in Mice[J]. Cellular Physiology and Biochemistry, 2017:1949-1964.

[2] Qu Z , Gao F , Li L , et al. Label-Free Quantitative Proteomic Analysis of Differentially Expressed Membrane Proteins of Pulmonary Alveolar Macrophages Infected with Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus and Its Attenuated Strain[J]. PROTEOMICS, 2017:1700101.

汇聚科研工匠·引领医学转化