细胞荧光染料标记检测实验

时间:2021-09-26浏览次数:204



Zenon®标记技术为制备荧光标记抗体提供了一种快速、通用且可靠的实验方法,此标记方法可利用各种荧光染料,并且起始原料可以为极少量、未纯化 (如杂交瘤细胞的培养上清液) 的抗体。 利用Zenon®标记技术标记的抗体适用于所有可使用直标抗体的应用领域。 Zenon® 标记技术的优势包括:

● 10 分钟贴记时间
● 每个标记1– 20 微克抗体
● 与BSA及其它稳定蛋白相容
● 无纯化步骤
● 灵活的抗体标










Zenon® - 标记技术如何工作

Zenon®标记技术提供一种多功能的、易于使用的方法,用于标记人和小鼠的IgG1,IgG2a和IgG2b抗体及兔IgG抗体。 特殊设计的Zenon®片段只结合一抗的Fc片段,这种快速、非共价结合方法能够迅速标记少量的一抗 (图1) Zenon®标记技术简单高效;整个标记步骤只需 10 分钟。
 
Zenon®抗体偶联物形成后可以稳定地储存待用;在使用前需要添加非特异性IgG来封闭未结合的Zenon®片段,无需柱纯化。 Zenon®复合物因而可直接应用到样品中。
Zenon®标记技术标记的抗体与观察到的直接标记的抗体偶联物呈现相似的荧光强度或酶活性 (图 2 )。

图1. Zenon® 标记技术工作原理。 Zenon®抗体的非共价标记与微量标记试剂盒、单克隆标记试剂盒、蛋白标记试剂盒的共价标记比较。 



图2. Zenon®标记技术生产出的标记抗体的亮度相当于或者比直接标记的抗体更亮。 使用别藻蓝蛋白(APC)共轭标记或者使用1微克Zenon® APC复合物非共轭标记各种淋巴标志物抗体。 然后,标记的抗体用于人外周血淋巴细胞样品的染色。 制备Zenon®染色复合物时,通过提高Zenon®标记技术试剂与所用一级抗体的比例可进一步提高该复合物的亮度。

 

Zenon®标记技术: 最终标记灵活性

当您需要改变标记物颜色或者检测特定荧光是否适合您的应用或抗体时,Zenon®标记技术可提供独特的标记灵活性。 可广泛选择的标记物、通用的标记技术,助您在流式细胞术 (图 3 ) 和荧光成像 (图 4 和 5 ) 中轻松获得不同颜色组合成的多色应用图像。


图3. 在流式细胞术中使用Zenon® 标记技术。 人外周血白细胞以下列三种抗体染色: 预先经Zenon® Alexa Fluor® 647 小鼠IgG1标记试剂盒 ( Z25008) 标记的抗CD3小鼠IgG1抗体 ( A21330 )、预先经Zenon® R-藻红蛋白小鼠IgG1标记试剂盒 ( Z25055 ) 标记的抗CD4小鼠IgG1抗体 ( A21334) 和预先经Zenon® Alexa Fluor® 488 小鼠IgG2a标记试剂盒 ( Z25102 ) 标记的抗CD8小鼠IgG2a抗体 (A21338 )。 图A和图B显示:分别区别橙色荧光信号与绿色荧光信号或者红色荧光信号与橙色荧光信号,可以将细胞进行区分,证明Zenon®标记的抗体在同一样品中不会互相干扰。 分析样品所用仪器及设置为:Coulter Elite流式细胞仪,针对藻红蛋白和Alexa Fluor® 488 染料使用 488 nm激发光,针对Alexa Fluor® 647 染料使用 633 nm激发光。



 

图4. 在荧光成像中使用Zenon®标记技术。 切取厚度为 14 µm的小鼠海马冠状切片,应用Zenon® Alexa Fluor® 488 小鼠IgG1标记试剂盒 ( Z25002 ) 标记的抗α-微管蛋白抗体 ( A11126) 染色。 切片用NeuroTrace® 530/615 红色荧光Nissl染料 ( N21482 ) 复染来观察神经元胞体,用Hoechst 33258 ( H1398 , H3569, H21491 ) 染色来观察细胞核。




图5. 在荧光成像中使用Zenon®标记技术。 微管蛋白和线粒体探针标记的牛肺动脉内皮细胞 微管蛋白采用Zenon® Alexa Fluor® 488 小鼠IgG2b标记试剂盒 ( Z25202 ) 标记的抗α-微管蛋白小鼠IgG2b单克隆抗体检测,线粒体采用Zenon® Alexa Fluor® 555 小鼠IgG2b标记试剂盒 ( Z25205 ) 标记抗氧化磷酸化酶复合体V亚单位α小鼠IgG2b单克隆抗体 ( A21350 ) 检测。 使用DAPI( D1306 , D3571, D21490 )给核酸染色。 



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