时间：2021-09-29浏览次数：2819
一、常用急性肝损伤动物模型造模方法
1. 药物诱导模型
对乙酰氨基酚（APAP）模型
机制：APAP经CYP450（CYP2E1/CYP3A4）代谢为毒性产物NAPQI，耗竭谷胱甘肽（GSH），引发线粒体氧化应激和坏死性凋亡。
关键蛋白：CYP2E1（代谢激活）、Nrf2（抗氧化应答）、JNK（应激信号放大）、MLKL（坏死性凋亡执行蛋白）。
临床关联：APAP是药物性肝损伤（DILI）最常见病因，临床治疗依赖N-乙酰半胱氨酸（NAC）补充GSH。
四氯化碳（CCl₄）模型
机制：CCl₄经CYP2E1代谢生成三氯甲基自由基（·CCl₃），引发脂质过氧化和肝细胞膜破坏，激活星状细胞导致纤维化。
关键蛋白：TNF-α（炎症放大）、TGF-β1（促纤维化）、Collagen I（纤维化标志物）。
临床关联：用于研究肝纤维化向肝硬化转化的机制，抗纤维化药物（如吡非尼酮）的临床前验证。
2. 酒精性肝损伤模型
慢性乙醇灌胃/液体饲料模型
机制：乙醇经ADH/CYP2E1代谢生成乙醛和ROS，诱导肠道菌群紊乱（LPS入血激活TLR4通路）和脂肪变性。
关键蛋白：TLR4/NF-κB（炎症）、SREBP-1c（脂肪合成）、CYP2E1（氧化应激）。
临床关联：研究酒精性肝炎（AH）的炎症靶点，临床试验探索抗TLR4抗体（如JKB-121）的疗效。
3. 缺血再灌注（I/R）损伤模型
部分肝缺血或原位肝血流阻断
机制：缺血期缺氧导致ATP耗竭，再灌注期ROS爆发激活Kupffer细胞释放促炎因子（如IL-1β、TNF-α）。
关键蛋白：HIF-1α（缺氧应答）、补体C3/C5a（炎症放大）、NLRP3炎性小体。
临床关联：肝移植和肝切除手术中I/R损伤的防治，临床试用ROS清除剂（如依达拉奉）。
4. 免疫介导模型
刀豆蛋白A（ConA）模型
机制：ConA激活T细胞和巨噬细胞，通过Fas/FasL通路诱导肝细胞凋亡，模拟自身免疫性肝炎。
关键蛋白：Fas/FasL（凋亡信号）、IFN-γ（Th1免疫应答）、Granzyme B（细胞毒性）。
临床关联：探索免疫抑制剂（如糖皮质激素）或抗FasL抗体（如APG101）的疗效。
5. 胆汁淤积性模型
胆总管结扎（BDL）模型
机制：胆酸蓄积激活FXR受体，诱导肝细胞凋亡和胆管反应性增生。
关键蛋白：FXR（胆酸调控）、Caspase-3（凋亡）、CK19（胆管标志物）。
临床关联：研究原发性胆汁性胆管炎（PBC），熊去氧胆酸（UDCA）的临床验证。
二、核心机制通路与靶点
1. 氧化应激通路
关键分子：NADPH氧化酶（NOX）、Nrf2-Keap1通路。
干预靶点：NAC、褪黑素、SIRT1激活剂（如白藜芦醇）。
2. 炎症信号通路
TLR4/MyD88/NF-κB通路：介导LPS诱导的炎症级联反应。
NLRP3炎性小体：驱动IL-1β成熟释放。
3. 细胞死亡通路
坏死性凋亡（Necroptosis）：RIPK1-RIPK3-MLKL轴。
凋亡（Apoptosis）：线粒体途径（Bax/Bak→Caspase-9→Caspase-3）。
4. 代谢紊乱通路
脂质代谢：SREBP-1c/PPARα失衡导致脂肪蓄积。
胆酸毒性：FXR/SHP调控胆酸合成。
三、临床转化研究进展
抗氧化治疗：NAC用于APAP中毒（临床一线），但需早期给药。
抗炎靶向药：抗TNF-α单抗（如英夫利昔）在酒精性肝炎中因感染风险受限。
细胞死亡抑制剂：Necrostatin-1（RIPK1抑制剂）处于临床前阶段。
肠道-肝脏轴干预：益生菌（如VSL#3）调节肠道菌群，减少LPS入血。
基因治疗：腺病毒载体递送IL-10或siRNA沉默TGF-β1（动物模型有效）。
四、模型选择与局限性
五、未来研究方向
多模型联合应用：如APAP叠加酒精模型模拟多重打击机制。
类器官与芯片肝脏：减少动物实验，提高人源化研究比例。
精准靶向治疗：基于单细胞测序筛选亚群特异性靶点。
生物标志物开发：如miR-122、HMGB1用于早期诊断。
急性肝损伤动物模型的机制研究已揭示氧化应激、炎症、细胞死亡等核心通路，关键蛋白（如CYP2E1、TLR4、MLKL）为临床干预提供了靶点。未来需结合多组学技术和临床队列验证，加速转化医学进程。
晶莱生物服务流程
晶莱生物实验服务项目
| 动物实验 | 细胞生物学 | 病理实验 |
| 消化系统模型 | 细胞培养 | 病理染色 |
| 胃酸分泌模型 | 普通细胞株 | HE染色 |
| 脓毒症模型 | 细胞缺氧培养 | 油红O染色 |
| 胃溃疡模型 | 细胞培养+支架 | 番红固绿染色 |
| 胰腺炎模型 | 干细胞培养 | Masson染色 |
| 肝纤维化模型 | 原代细胞分离/提取/培养 | 天狼猩红染色 |
| DIO肥胖模型 | 细胞转染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
| 胆结石模型 | Trans well共培养 | 阿利新蓝染色 |
| 结肠炎(UC)模型 | 细胞增殖 | 甲苯胺蓝染色 |
| 脂肪肝模型 | 细胞计数 | 尼氏染色 |
| 急性肝损伤模型 | 生长曲线测定 | LFB髓鞘染色 |
| 免疫、代谢系统疾病模型 | 存活曲线测定 | 普鲁士蓝染色 |
| 骨质疏松模型 | ccK-8增殖检测 | VG染色 |
| 糖尿病模型 | MTT增殖检测 | EVG染色 |
| 高尿酸血症模型 | CFSE检测增殖-流式检测 | VonKossa染色 |
| 呼吸系统模型 | BrDU检测-免疫荧光法 | 刚果红染色 |
| 肺纤维化模型 | 细胞凋亡 | 苏丹黑B染色 |
| 慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式检测细胞凋亡 | Trap染色 |
| 急性肺损伤模型 | WB检测凋亡相关蛋白 | 抗酸染色 |
| 哮喘模型 | 透射电镜观察凋亡小体 | 革兰氏染色 |
| 肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB显色) | AB-PAS染色 |
| 支气管炎模型 | Tunel(荧光法,含试剂盒) | 亚甲基蓝染色 |
| 泌尿生殖系统模型 | DNA ladder法 | 苯胺蓝染色 |
| 慢性肾衰模型 | 细胞周期 | 荧光 DAPI染色 |
| 急性肾衰模型 | 细胞显微计数 | 普鲁士蓝染色 |
| 肾间质纤维化模型 | PI染色 | 间苯二酚碱性品红染色 |
| 肾结石模型 | BrdU渗入法 | 银染 |
| 肾炎模型 | 免疫荧光染色 | 黑色素染色 |
| 子宫内膜异位症模型 | PI流式检测细胞周期 | 镀银染色 |
| 心血管系统模型 | 细胞运动 | PASM 六胺银染色 |
| 冠心病模型 | Transwell检测细胞迁移 | VG染色 |
| 心肌梗死模型 | Transwell检测细胞侵袭 | 富尔根染色 |
| 心脏骤停模型 | 细胞划痕 | 亚甲基蓝染色 |
| 慢性心力衰竭模型 | 细胞克隆 | 碘-碘化钾染色 |
| 动脉粥样硬化模型 | 集落形成法/稀释铺板方法 | Goldner三色法染色 |
| 白血病模型 | 软琼脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
| 高血压模型 | 毛细管克隆法 | 改良苯酚品红染色 |
| 神经系统模型 | 体外实验血管生成 | 网状纤维染色 |
| 脑卒中模型 | 磁珠分选细胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
| 栓塞性脑梗死模型 | 流式分选细胞 | 镀银染色 |
| 脑出血模型 | 开机费 | movat五色染色 |
| 脑损伤模型 | 单色 | 维多利亚蓝染色 |
| 脊髓损伤模型 | 双色 | 免疫组化 |
| 帕金森模型 | CBA多细胞因子流式检测 | 免疫组化预式 |
| 老年痴呆模型 | 组织/血液细胞制备 | 免疫组化正式 |
| 应激模型 | 组织单细胞制备 | 免疫荧光（石蜡-单标） |
| 骨骼疾病模型 | 中性粒细胞提取 | 免疫荧光（石蜡-双标） |
| 骨折模型 | 其他样本细胞制备（如血液等） | 免疫荧光（石蜡-三标） |
| 骨缺损模型 | 外周血PBMC分离 | 免疫荧光（冰冻-单标） |
| 风湿免疫性关节炎模型 | 线粒体组学 | 免疫荧光（冰冻-双标） |
| 骨关节炎模型 | 线粒体膜电位检测-流式法 | 制片前处理 |
| 五官疾病模型 | 线粒体膜电位检测-免疫荧光法 | 石蜡组织包埋 |
| 眼科疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--流式 | 特殊包埋（细胞、材料、眼球等） |
| 鼻腔疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光 | 软化（肝硬化、皮肤结痂、植物等） |
| 皮肤疾病模型 | 线粒体通透性转换孔（mPTP） | 骨组织脱钙（小） |
| 皮肤损伤模型 | 溶酶体免疫荧光法 | 骨组织脱钙（大） |
| 肿瘤疾病模型 | 线粒体+溶酶体共定位 | 骨组织EDTA脱钙（小） |
| 原位瘤模型 | 内质网 | 骨组织EDTA脱钙（大） |
| 转移瘤模型 | 线粒体钙瞬时变化检测-流式 | 石蜡白片 |
| 皮下植瘤模型 | ATP检测 | 细胞爬片 |
| ADP检测 | ||
| AMP检测 | ||
| 流式 | DNA/RNA半定量检测 | 基因编辑工具 |
| 组织细胞悬液处理 | pcr检测mRNA | 合成（3保1）片段/质粒/引物合成 |
| 细胞处理 | microRNA检测 | 质粒载体构建 |
| 血液标本处理 | LncRNA表达量的检测 | 过表达腺病毒载体构建包装 |
| 细胞刺激培养 | CirRNA表达量的检测 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
| 单色检测 | 凝胶电泳 | 过表达慢病毒载体构建包装 |
| 双色检测 | 基因合成 | shRNA慢病毒载体构建包装 |
| Annexin V/PI凋亡 | ＜300 | 过表达腺相关病毒载体构建包装 |
| 细胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
| 1500 - 5000 | 稳转细胞株 | |
| >5000 | ||
| 特殊序列 | ||
| ELISA | WB | qPCR |
| 组织匀浆处理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
| ELISA（不含试剂盒）48T/kit | WB检测一（10孔膜/指标） | mRNA引物设计及合成 |
| ELISA（不含试剂盒）96T/kit | 灰度值分析及作图一（10孔膜/指标） | miRNA引物设计及合成 |
| ELISA（含国产试剂盒）48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物设计及合成 |
| ELISA（含国产试剂盒）96T/kit | WB检测二（15孔膜/指标） | CircRNA引物设计及合成 |
| 灰度值分析及作图二（15孔膜/指标） | mRNA RT-qPCR | |
| miRNA RT-qPCR | ||
| LncRNA RT-qPCR | ||
| CircRNA RT-qPCR |
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