肠炎动物模型

时间：2020-03-16浏览次数：3450

建模背景
现如今，有多种动物实验模型被广泛用于研究炎症性肠炎（inflammatory bowel disease, IBD）的病因、发病机制及测试新开发药物药效等，尤其以葡聚糖硫酸钠盐（Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS）结肠炎（ulcerative colitis,UC）模型应用最广。

模型发展历程

模型特点
使用小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠或猪、兔等动物均可造模，通过给予动物自由饮用不同浓度的DSS水溶液，根据用药时间及用药周期可制成急性和慢性两种结肠炎模型。该模型症状表现与人类UC极为相似，主要表现为腹泻、黏液样便、粪便潜血、肉眼血便、重量减轻、活动度减少，毛色变差等。

肠炎模型组织学特征

实验方法（以小鼠动物模型为例说明）
实验候选动物：C57BL/6或BALB/c，雌性，6-8周。每组至少8-10只小鼠。
造模试剂：DSS，Mw 36000-50000，含硫量16-20%。
DSS浓度：急性期模型通常为3-5%，慢性期模型通常为1-3%；可根据实验需求及动物类型摸索浓度。该浓度为质量体积比，使用饮用水配置后，过滤除菌。

急性DSS结肠炎模型
Day1：称重并标记各组C57BL/6小鼠。待造模小鼠饮用3-5% DSS水溶液，未处理组小鼠饮用正常水。
Day3：给予待造模小鼠更换新鲜3-5%DSS饮用水。
Day5：给予待造模小鼠更换新鲜3-5%DSS饮用水。
Day8：给予待造模小鼠更换新鲜不含DSS的饮用水。

慢性DSS结肠炎模型
Day1：称重并标记各组C57BL/6小鼠。待造模小鼠饮用1-3% DSS水溶液，未处理组小鼠饮用正常水。
Day3：给予待造模小鼠更换新鲜1-3%DSS饮用水。
Day5：给予待造模小鼠更换新鲜1-3%DSS饮用水。
Day8：给予待造模小鼠更换新鲜不含DSS的饮用水。
Day22-Day26：重复Day1-Day5操作。
Day29：给予待造模小鼠更换新鲜不含DSS的饮用水。
Day43-Day47：重复Day1-Day5操作。
Day50：给予待造模小鼠更换新鲜不含DSS的饮用水。

DSS UC model

如何评价造模是否成功？
1）. 疾病活跃指数评分 Disease Activity Index, DAI score
从三个方面进行评估打分，分别为体重、粪便粘稠度、粪便潜血等指标，评分细则见表-3。其中，粪便潜血测试可使用尿粪隐血检测试剂盒（联.苯.胺法）（Yeasen,60403ES60）。DAI评分为三个指标之和。

DAI评分细则

2). 组织学变化评分
a) 溃疡形成个数：无—0，1个溃疡—1,2个溃疡—2，3个溃疡—3，＞3个溃疡—4
b) 上皮细胞变化：正常—0，杯状细胞缺失—1，杯状细胞大面积缺失—2，隐窝缺失—3，隐窝大面积缺失或息肉状再生—4
c) 炎症浸润：无—0，隐窝周围浸润—1，黏膜肌层出现浸润—2，黏膜肌层普遍浸润，黏膜增厚—3，黏膜下层浸润—4
d) 淋巴结形成：无—0，1个淋巴结—1,2个淋巴结—2，3个淋巴结—3，＞3个溃疡—4

组织学变化评分为上述各指标之和，在急性结肠炎模型中淋巴结形成不做评分。组织学分析的标准方法为HE染色（Yeasen, 60524ES60）。

DSS溃疡性结肠炎组织学变化模拟图

3). 结肠长度
急性结肠炎模型中，第8天可检测到结肠长度缩短；慢性结肠炎模型中，结肠长度缩短更加明显。

4). 总结
DSS UC动物模型构建应先进行预实验，摸索建模条件，建议预实验每组小鼠8-10只，并设立对照组。通常出现体重减轻、稀便、腹泻、血便或粪便潜血、溃疡可视为DSS药物有效，造模成功。