Mouse肝原位瘤

实验材料

1、实验动物 

       清洁级BALB/c近交系小鼠，6-8周龄，雄性，体重为18-20g，购于北京维通利华实验技术有限公司；饲养环境：清洁无尘，空气新鲜，温度17-23度，相对湿度50-65%，噪音85分贝以下；饲养方法：每周更换3次垫料，添加4次饲料，确保垫料清洁干燥，饲料充足新鲜。适应牲喂养1周后进入实验状态。

2、实验细胞株

       小鼠H22肝癌细胞株

实验方法

       1、H22肝癌细胞复苏及培养：将装有腹水型H22肝癌细胞株的冻存管从-80℃冰箱取出，并迅速放入盛有37℃纯水的恒温水浴箱中，保持摇动。融化后，在无菌条件下打开冻存管，吸出细胞悬液，移入离心管中，加入含15%胎牛血清的DMEM细胞培养液至10ml，1000rpm离心5min，弃上清液，加入新培养液，吹打，重新悬浮细胞，移入培养瓶中，在CO2培养箱（37℃，5%CO2）中培养。复苏细胞培养12h后，镜下观察细胞生长情况，细胞呈聚团状，然后进行细胞传代换液。H22肝癌细胞株是腹水型细胞株，悬浮生长，待细胞计数达1×107个/ml浓度时，且细胞处于对数生长期时方可进行实验操作。

       2、小鼠肝癌细胞原位移植瘤模型原位组小鼠用5%水合氯醛0.06ml/10g麻醉，平卧位固定于鼠板上，用胶带固定鼠的四肢，手术前用脱毛膏进行脱毛，以便清楚的观察手术位置。将脱毛膏擦洗干净，用碘伏消毒后在左腹腔做一长约1cm横断面小切口。用生理盐水润湿过的棉签将肝左叶轻轻拉出，使其充分暴露。用25微升的微量注射器取适量细胞悬液10微升（1.5*106/ml）缓慢注射入肝左叶中，注射结束后，在肝左叶中停留约1-2min后将注射器拔出。注射成功后，用棉签按压止血约1-2min后，将肝脏放回体内原位，逐层缝合切口，涂抹抗生素，置于保暖箱中及注意防止感染，约30min后小鼠苏醒。

实验结果

       造模后约3周左右可在肝脏位置触摸到肿瘤，处死并解剖发现肝脏均长出肿瘤。实验期间，约15天左右有部分小鼠出现腹水情况，疑造模时细胞漏出至腹腔中导致腹水现象。