【五分钟讲实验】实验动物血样检测老不准，多半是因为这个！

采血是动物实验中最常用的操作技术之一。在实验过程中发现，大鼠血液生化结果受到诸多因素的影响。按照时间顺序主要分为2个阶段：

1.采样准备过程：就是血样检测前的过程，包括准备实验大鼠、血样采集处理;

2.采样分析过程：就是检测血样的过程，包括分析仪器、试剂等。

1. 固定因素

实验大鼠品系、微生物级别、性别、年龄是影响大鼠血液生化指标检测结果的固定因素。

因此，根据选用大鼠品系、级别、性别、年龄建立适合的参考区间来解决固定因素的影响。

2. 饲养

饲养是可变因素中的外源性因素，饮食也是影响血液生化指标的重要因素（高碳水化合物食物可使血糖升高;高蛋白或高核酸食物引起尿素及尿酸的升高;高脂肪食物引起甘油三酯(TG)升高）。

动物实验室的饲养环境不同，喂养的饲料也会使大鼠血液生化指标发生明显改变，在展开课题研究时根据实验设计选择合适的饲料进行正确饲养，避免因饲料喂养干扰实验结果。

3. 采血前禁食时间

空腹一般是指进食后12h（空腹时间过长，饥饿时间就过久，可使血糖、蛋白质降低，胆红素升高）在进行动物实验过程中对实验大鼠禁食时间各实验室并不统一，使用较多的禁食时间有12h、14h、16h、19h、24h。

若餐后采集血液标本，血清常出现乳糜状，而乳糜状血清对光线有一定的散射作用，对样本空白吸光度值产生干扰;被分析物的分布非均一性，导致测定过程中的随机误差加大。使TG、葡萄糖升高，影响检测结果的正确性。

规范空腹采集血样标准，当有特殊情况为保证实验动物体重而不能采取禁食采血时要注意，未禁食采集血样条件保持一致，避免检测结果的差异。

4. 饲养环境

相关研究表明血液生化指标检测结果经统计学分析证明普通级与SPF级大鼠血液生化指标差异显著，多数生化指标雌雄之间存在显著差异。

相关研究表明普通级大鼠的ALT、ALP、TP、BUN、TBIL、CRE均高于SPF级大鼠（P＜0∙01）；SPF级大鼠的CHO、CK、AST、ALB、GLU均高于普通级大鼠（P＜0∙01）。

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5. 血样采集

血清最好使用带分离胶真空采血管，这样离心后血清和血细胞被分离胶隔开，可以保证血清的检测质量。

若是检测需要血浆，根据检测项目提前选择好抗凝剂:

EDTA-血常规

枸橼酸钠—凝血功能、血栓弹力图、血小板功能检测（抗凝剂与血比例为1：9）

草酸钾/氟化钠---抑糖分解，血糖测试

枸橼酸钠---血沉淀、血流变检测（抗凝剂与血比例为1：4）

肝素钠---血浆生化，血气分析

分离胶---血清生化检测

普通---血清分离（促凝和自然凝血）

正确选择抗凝剂，避免因错误使用抗凝剂导致问题结果的发生。同时建议在动物实验前后进行比较时应统一血清或是血浆。

6. 麻醉剂选择

常用于麻醉的有氨基甲酸乙酯(乌拉坦)、水合氯醛、乙醚、戊巴比妥钠、二氧化碳窒息麻醉。

有相关文献报道无麻醉断头与戊巴比妥钠麻醉采血结果差异较大，实验过程中选择合适的麻醉剂量，并控制麻醉时间进行采血，避免麻醉影响大鼠血液生化指标。

7. 采血部位

采血部位的差异一方面与体位有关，另一方面是动脉、静脉、动静脉混合血的差异。

（1）用血量较少的检验如红、白细胞计数，血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。

（2）当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。

（3）如研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、静脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH以及K+、Na+、Cl-离子浓度，必须采取动脉血液。

如果没有特殊要求，大鼠的终末采血都推荐安乐死或者深度麻醉后心脏采血，这种方式采血比较多，而且不容易污染。

对于大鼠非终点采血，无论单次采血还是多次采血都比较推荐使用注射器进行颈静脉采血，随抓随采。如果不从尾静脉给药的话，尾静脉采血也是非常推荐的方式。

若实验过程需要多次采血，采血部位要统一。

1. 血清质量

接收到大鼠血样后，查看血清质量并进行标注后开始检测。若不能及时检测，分离血清、密封放冰箱里保存。

在室温且开放式保存可使血样蒸发，导致检测结果的升高。（保存不当容易发生溶血，红细胞中一些成分释放进入血清或者血浆，使ALT、AST、乳酸脱氢酶、钾、总胆红素、肌酐、总蛋白检测结果含量增加;红细胞的破裂导致检测血样出现特有的红色，从而干扰吸光度值检测，使检测结果失去真实性和正确性。）

2. 试剂盒

生化检测使用的试剂盒有方法学和生产厂家的差异 ，酶浓度、底物的种类和浓度、缓冲液的种类、离子强度和pH、温度、激活剂与抑制剂配方的差异，造成试剂盒的性能指标如稳定性、准确度、精密度、抗干扰性、线性范围、灵敏度等也有所不同。

建议实验中使用固定的试剂盒，选择能够溯源到参考方法或推荐方法的校准品。

3. 仪器设备

使用性能符合要求或经检定合格的分光光度计、半自动或全自动生物化学分析仪。全自动生化分析仪检测速度快、精密度高，使用双波长，能够减少杂散光影响及减少样本本身光吸收的干扰，建议实验前后数据比对用相同检测仪器设备。

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吸管、真空采血管、样品杯等玻璃耗材可以选用一次性耗材，反复使用的耗材一定正确清洗，并注意实验室用水，清洁程度直接影响实验结果的准确性。

综上所述，实验大鼠准备、血样采集、分析仪器、试剂等诸多影响因素，都会影响大鼠血液生化检测。

通过以上列举的各项影响因素，在实验找到直接影响检测结果的因 素，采取积极有效的应对措施，采取积极有效的应对措施，确保大鼠血液生化指标检测结果的准确。

参考文献：

1.李红，丁晓静，施嘉琛.大鼠不同部位采集血液标本生化检测的质量控制.毒理学杂志1002－3127(2013)06－0457－02

2.Influencing factors of blood biochemical detection in rats LI Hong* ，ZHANG Wei，JING Haiming，YU Ｒuyang，GAO Wenhui，ZHAO Liwen，LIN Changying * Central Laboratory，Beijing Center for Disease Control and Prevention，Beijing Key Laboratory of Diagnostic and Traceability Technologies for Food Poisoning /Beijing Ｒesearch Center for Preventive Medicine，Beijing100013 ，China

3.Detection of the Blood Biochemistry of Conventional and SPF Wistar Rats in Liaoning Area BAO Yu-long LI Jian DU Jia-lin QI Yue LI Xian-hua ZHANG Hong XIANG Shao-jie JIA Dong （Liaoning Institute of Traditional Chinese Medicine Shenyang110034 China）.