RNAi

时间:2018-10-30浏览次数:861

实验意义

1. 可应用于阐明基因组结构与功能以及基因之间相互作用的科学,对于探索基因在生命活动中的作用及其机制具有重要意义。

2. 能够为一些疾病提供新的诊断方法和治疗方法,可有助于医生获得更多治疗信息并进行个性化精准医疗。


实验原理及步骤

1. siRNA的设计和选择:根据研究目的选择合适的数据库及软件筛选靶序列的siRNA,通常需要设计多个siRNA,找到最优最有效的siRNA序列;

2. siRNA的制备:常用的体外制备方法有化学合成、体外转录、长片段dsRNA经RNase III类降解,以及通过siRNA表达质粒载体或者病毒载体以及PCR制备的siRNA表达框架(siRNA expression cassettes, SECs)在细胞中表达制备siRNA;

3. siRNA的转染:siRNA、siRNA表达载体或者siRNA表达框架转染进入细胞的方法主要有磷酸钙共沉淀转染、电穿孔转染、机械法(显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂转染;

4. 检测靶基因的表达:WB等方法检测靶基因的表达或者可以通过标记siRNA(如荧光标记)分析其表达,还可用作siRNA胞内定位和双标记实验来追踪转染过程以及靶基因表达沉默过程。


结果展示

RNAi.png



实验周期及交付标准

1. 实验周期:2-4周

2. 交付标准:质粒、片段验证结果、实验报告(实验步骤、试剂、仪器等)


需确认的信息

1. 基因的种属及ID号

2. 基因序列

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