蛋白相互作用分析

时间:2018-10-30浏览次数:897

蛋白相互作用分析:蛋白质是细胞活性和功能的执行者,且蛋白质是依靠蛋白间相互作用执行功能的,因而研究蛋白的相互作用对于研究细胞活性和功能、解释生命过程和现象具有重要意义。

 

实验意义

1.蛋白相互作用分析是研究蛋白功能的重要工具。

2.蛋白相互作用出现异常会影响正常细胞的活性和功能,导致许多疾病的发生,比如神经退行性疾病和恶性肿瘤等,这对相关疾病的病理诊断以及临床治疗研究具有重要意义。

 

实验原理

1. GST蛋白的表达:选择合适的蛋白表达系统表达带GST标签的融合蛋白;

2. 制备诱饵蛋白-GST融合蛋白裂解液;

3. 通过谷胱甘肽亲和树脂柱富集诱饵蛋白-GST融合蛋白,洗脱未结合的杂蛋白;

4. 目标蛋白也可以通过蛋白表达系统进行表达纯化;

5. 将含有目标蛋白的混合物加入柱中与亲和固定在柱上的诱饵蛋白相互作用从而被吸附,洗脱未结合的杂蛋白;

6.用谷胱甘肽洗脱缓冲液将蛋白相互作用复合物洗脱下来;

7. 通过SDS-PAGE和Western Blot或质谱进行检测。

 

结果展示

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实验周期及交付标准

1. 实验周期:3-5周

2. 交付标准:WB检测结果、载体设计报告、实验报告(试剂、耗材、实验步骤)、原始数据等

 

需确认信息

1. 目的蛋白及信息

2. 样本种属及类型

3.是否提供一抗


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