蛋白表达纯化

时间:2018-10-30浏览次数:1506

蛋白的表达:是指通过模式生物来表达目的的外源基因蛋白的一种现代分子生物学技术,表达系统主要是由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成,从而实现外源基因通过载体在宿主中的表达。

 

实验意义

1.蛋白表达技术在基因工程技术中占有核心地位,在实际生产中具有重要的应用意义。

2.蛋白表达技术已经广泛应用于生物学各个具体领域,特别是体内的功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用。

实验原理

1. 获得目的基因;

2. 构建合适的载体(注意根据目的基因和纯化方式的选择等多方面因素选择融合标签);

3. 将目的基因插入表达载体中,并通过测序进行验证;

4. 载体转化进入大肠杆菌等宿主菌后,测序筛选挑单克隆菌落进行扩大培养,IPTG诱导靶蛋白的表达;

5. 破碎菌体后提取蛋白,并通过融合标签纯化得到靶蛋白。

 

分类

1. 真核表达系统:真核表达系统主要有昆虫表达系统、酵母表达系统和哺乳动物细胞表达,其中酵母表达和哺乳动物细胞较为常见。

2. 无细胞体外表达系统,又称为体外翻译系统,通过模拟细胞的生命活动和现象来重现胞内蛋白的转录和翻译过程。

 

结果展示

原核表达系统

纯化1.png


真核表达系统

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无细胞体外表达系统

纯化3.png

实验周期及交付标准

1. 实验周期:4-6周

2. 交付标准:目的蛋白、实验报告(试剂、耗材、实验步骤)、原始数据等。

 

需确认的信息

1. 表达系统采取方式。

2. 纯化步骤选择。

 

参考文献

[1] Yu X , Abdullahi A Y , Wu S , et al. Prokaryotic Expression of α-13 Giardin Gene and Its Intracellular Localization in Giardia lamblia[J]. Biomed Research International, 2017, 2017:1603264.

[2] Anwised P , Jangpromma N , Temsiripong T , et al. Cloning, Expression, and Characterization of Siamese Crocodile (Crocodylus siamensis) Hemoglobin from Escherichia coli and Pichia pastoris[J]. Protein Journal, 2016, 35(4):256-268.

[3] Krinsky N , Kaduri M , Shainskyroitman J , et al. A Simple and Rapid Method for Preparing a Cell-Free Bacterial Lysate for Protein Synthesis[J]. Plos One, 2016, 11(10):e0165137.

 

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