细胞的能量供应

时间:2018-10-30浏览次数:178

细胞的能量供应:生物体能够生长、繁殖、保持结构和形态以及对外界环境作出反应,需要不断地进行物质和能量的代谢。


实验意义

1. 研究生物体与外界环境之间能量的交换以及生物体内能量的转换过程有助于更深刻地认识生命的基本特征。

2. 肿瘤细胞与正常细胞能量代谢存在差异,其线粒体呼吸损伤,糖酵解代谢活跃(Warburg效应),有助于研究和开发抗肿瘤药物。


实验步骤 

1. 线粒体:

①JC-1法检测线粒体膜电位;

②线粒体通透性转换孔(mPTP)的开放检测(钙黄素-AM法和四甲基罗丹明乙酯TMRE法);

③心肌磷脂水平检测(使用NAO探针标记线粒体表面的未氧化的心肌磷脂,从而对线粒体进行损伤/氧化的评估);

④线粒体内钙离子浓度的检测(Rho-2或Fluo-2为线粒体内钙离子的特异性荧光探针)。


2. ATP:

①基于荧光素酶的ATP检测试剂盒检测ATP水平;

②使用高效液相色谱测定ATP、ADP、AMP的含量;

③基于肌酸激酶催化肌酸和ATP产生磷酸肌酸的ATP含量试剂盒(700nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量从而确定ATP含量)。


3. 线粒体和溶酶体的荧光共定位:

①Mito-Tracker Green标记线粒体为绿色荧光,Lyso-Tracker Red标记溶酶体为红色荧光,荧光显微镜下进行观察;

②活体细胞溶酶体膜通透性(LMP)/完整性吖啶橙荧光检测试剂盒可检测活体细胞的溶酶体膜通透性。


4. 内质网:

①ER-Tracker Red标记内质网为红色荧光探针;

②内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒(Mag-Fluo-AM为内质网钙离子特异性荧光探针)。


结果展示

1. 线粒体膜电位检测(JC-1法[1]


JC-1.png


JC-1 2.png


2. 线粒体通透性转换孔(mPTP)的开放检测(四甲基罗丹明乙酯TMRE法[2]


TMRE法.png


3. 线粒体和溶酶体荧光共定位[3]


荧光共定位.png


4. 内质网荧光定位[4]


荧光共定位.png


实验完成周期及交付标准

1. 实验周期:一般检测的周期为7-15个工作日,需要示工作量和具体情况而定。

2. 交付标准:免疫组化/免疫荧光图片、酶标仪结果、统计学分析结果图和实验报告(试剂、耗材、实验报告和原始记录)等。


需确认的信息 

1. 细胞样品是否需要进行处理以及样品的分组情况?

2. 客户是否需要我方提供免疫荧光抗体和生物学功能检测试剂盒?


文献参考

[1] Elefantova Katarina, Lakatos Boris, Kubickova Jana, et al. Detection of the Mitochondrial Membrane Potential by the Cationic Dye JC-1 in L1210 Cells with Massive Overexpression of the Plasma Membrane ABCB1 Drug Transporter [J]. International Journal of Molecular Sciences, 2018, 19(7):

[2] Wang G., Huang H., Zheng H., et al. Zn2+ and mPTP Mediate Endoplasmic Reticulum Stress Inhibition-Induced Cardioprotection Against Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury [J]. Biological Trace Element Research, 2016, 174(1): 1-9.

[3] Hu F., Cai X., Manghnani P. N., et al. Multicolor monitoring of cellular organelles by single wavelength excitation to visualize the mitophagy process [J]. Chemical Science, 2018, 9(10): 2756-61.

[4] Herdman B. P., Paton J. C., Wang H., et al. Vacuolation Activity and Intracellular Trafficking of ArtB, the Binding Subunit of an AB5 Toxin Produced by Salmonella enterica Serovar Typhi [J]. Infection & Immunity, 2017, 85(8):

 

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