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3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞

价 格¥询价
产品编号:GL0021
细胞数量:1*10^6
组织来源:胚胎
细胞种属:小鼠
培养基:10%FBS+90%DMEM
形态特征:成纤维状
传代方法:建议传代比例为1:2至1:3
培养条件:环境:空气,95%; 二氧化碳(CO2),5%;温度,37℃
细胞描述
细胞冻存:液氮冻存(冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO)
细胞运输:干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输(T25瓶)

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产品详情

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冻存细胞接收后的处理:

1.干冰运输,收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏;
2.收到细胞后,若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

复苏细胞接收后的处理:

1.收到细胞后,请首先检查培养瓶是否破损或漏液,培养液是否混浊,如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后,在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片,若有贴壁细胞脱落,可收集上清离心,将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要消化处理,如果细胞长满90%,可选择传代处理。
4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题,出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

细胞培养方法:

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
   ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
   ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
   ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
   ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
   ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
   ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
   ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
   ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
   ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
   ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
   ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
   ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。