肝癌细胞-Huh7

细胞库细胞冻存步骤：

1、取对数生长期细胞，经胰酶消化后加入适量冻存液， 用吸管吹打制备成细胞悬液（1×106--5 ×106细胞/ml）

2、加入1ml细胞于冻存管中，将冻存管放入 4℃ 冰箱，约20min。再放入 -20℃ 冰箱，约 30min；

3、接下来放入-80℃超低温冰箱 16-18 小时，放入液氮罐长期保存，并在自己的笔记本和冻存记录本上做好记录。

冷冻保存细胞方法一:

冷冻管置于4℃(30－60 分钟)→-20℃( 30 分钟) → -80℃(16－18 小时或隔夜)→ 液氮罐长期储存。  

冷冻保存细胞方法二:

冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80 ℃以下， 再放入液氮中长期储存。

（11960-077 高糖DMEM，液体）（11960-051 高糖DMEM，液体）

注意：-20℃不可超过1 小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。