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人肾癌Wilms细胞-G-401

价 格¥询价
产品编号:GL0010
细胞数量:1*10^6
组织来源:肾脏
细胞种属:人
培养基
形态特征:上皮细胞样,贴壁生长
传代方法
培养条件
细胞描述:G-401细胞来源于韦尔姆斯氏瘤,该细胞表达成肾细胞生长因子。
细胞冻存
细胞运输:T75瓶或者1mL冻存管包装

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产品详情

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G-401细胞人肾癌Wilms细胞培养步骤:

一.培养基及培养冻存条件准备:

    1) 准备McCOY's 5A培养基(McCOY's 5A,SIGMA,货号M4892),90%;优质胎牛血清,10%。

    2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

    3) 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。


二.细胞处理:

    1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

    2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

          对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

              1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

              2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

              3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

              4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

    3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。


G-401细胞人肾癌Wilms细胞注意事项:

    1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

    2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。